免疫復合物對單核巨噬細胞調(diào)節(jié)及其機制的實驗研究.pdf

1、研究背景：系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種臨床表現(xiàn)有多系統(tǒng)損害癥狀的慢性系統(tǒng)性自身免疫病，其血清具有以抗核抗體為主的大量不同的自身抗體。臨床表現(xiàn)復雜多樣，以病情緩解和急性發(fā)作交替為特點?；颊叩淖陨砜乖饕羌毎藘?nèi)的不溶性(如組蛋白、DNA)和可溶性（如核糖核蛋白）成分、細胞膜成分（如紅細胞、血小板表面抗原）、細胞內(nèi)其他成分（如磷脂）等?；颊唧w內(nèi)的自身抗體主要有抗核抗體(ANA)、抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體、抗單鏈DNA( ssDNA

2、)抗體、抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SSA(Ro)抗體、抗SSB(La)抗體、抗rRNP抗體、抗磷脂抗體等。
　　 SLE的病因和發(fā)病機制尚不明確，可能與遺傳、環(huán)境、雌激素等因素有關(guān)。研究證明SLE的易感性與多個基因有關(guān)。多個基因在某種條件（壞境）下相互作用而改變了正常免疫耐受性而致病。外來抗原（如病原體、藥物等）引起B(yǎng)細胞活化。在易感者因免疫耐受性減弱，B細胞通過交叉反應與模擬外來抗原的自身抗原相結(jié)合，并將抗原遞呈給T細胞，使

3、之活化，在T細胞活化刺激下，B細胞得以產(chǎn)生大量不同類型的自身抗體，造成大量組織損傷。所以B細胞的活化在SLE發(fā)病中起重要作用。
　　 SLE中細胞因子存在表達和應答異常，影響細胞免疫和體液免疫，組成一個復雜的免疫調(diào)控網(wǎng)絡。多種細胞因子（如TNF-a、IL-I、IFN-a）在炎癥和組織損傷中起主要作用。但大多數(shù)細胞因子的來源還不很清楚。
　　 SLE是一種免疫復合物病。免疫復合物由自身抗體和相應的自身抗原結(jié)合而成。當免疫復

4、合物生成過多或清除有障礙時，就會沉積于皮膚、關(guān)節(jié)和腎臟等組織器官，引起炎性反應和免疫損傷。單核巨噬細胞系統(tǒng)(mononuclear phygocytesystem，MPS)由人體重要的免疫細胞組成，在固有免疫應答中發(fā)揮重要作用，并參與特異性免疫應答。MPS通過吞噬異物、細菌、衰老和突變的細胞以及免疫復合物，維持機體的免疫穩(wěn)態(tài)，同時活化的單核巨噬細胞能分泌大量趨化因子和炎癥因子，參與機體固有和獲得性免疫調(diào)節(jié)。由于SLE患者MPS的吞噬功能

5、下降引起循環(huán)免疫復合物增高，因此易導致免疫復合物在組織器官沉積而引起免疫損傷。免疫復合物不僅參與組織損壞而且能刺激樹突細胞產(chǎn)生細胞因子和活化B細胞。在狼瘡的發(fā)生發(fā)展中，免疫復合物的清除障礙和MPS功能異常起重要作用，但免疫復合物和MPS的相互關(guān)系尚未有研究。在本研究中，我們著眼于免疫復合物對MPS功能的調(diào)節(jié)作用，探討免疫復合物和MPS在SLE免疫病理中的作用及其機制。
　　 目的：通過研究免疫復合物對U937細胞和U937細胞誘

6、導產(chǎn)生的巨噬細胞的增殖、分泌、吞噬功能的影響以及發(fā)揮作用的機制，全面觀察免疫復合物對單核巨噬細胞系統(tǒng)潛在調(diào)節(jié)作用，從而探討免疫復合物在SLE的發(fā)病和病情進展中
　　 方法：U937細胞按常規(guī)方法培養(yǎng)和傳代，狀態(tài)良好的U937細胞直接用于檢測增殖和分泌功能實驗以及機制的研究。PMA誘導U937細胞成巨噬細胞后用于檢測吞噬功能實驗。實驗共分六組。免疫復合物組：細胞壞死上清+系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者血清；對照組有五組：（壞死上清+

7、正常人血清）組、壞死上清組、SLE血清組、正常人血清組和培養(yǎng)基組，以上分別作用于U937細胞和U937細胞誘導產(chǎn)生的巨噬細胞。24h后，用CCK-8法檢測U937細胞的增殖，RT-PCR法檢測U937細胞分泌腫瘤壞死因子a(TNF-a)和B細胞活化因子(BAFF)的變化，中性紅比色法檢測誘導產(chǎn)生的巨噬細胞的吞噬功能。RAGE抗體和HMGBlAbox阻斷實驗研究作用機制。
　　 結(jié)果：1免疫復合物能促使單核細胞的增殖，但使其吞噬能

8、力降低表明單核巨噬細胞是一種異?；罨癄顟B(tài)。
　　 2免疫復合物增加單核巨噬細胞的BAFF的分泌，表明免疫復合物通過表達大量BAFF從而活化B細胞產(chǎn)生大量自身抗體。
　　 3免疫復合物可使單核細胞TNF-a分泌增加。表明在狼瘡體內(nèi)單核細胞是大量TNF-a的來源。
　　 4抗RAGE抗體和HMGBlAbox拮抗免疫復合物的作用表明免疫復合物通過HMGBI-RAGE通路發(fā)揮作用。
　　 結(jié)論：(1)免疫復合物促