免疫復(fù)合物對(duì)單核巨噬細(xì)胞調(diào)節(jié)及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種臨床表現(xiàn)有多系統(tǒng)損害癥狀的慢性系統(tǒng)性自身免疫病，其血清具有以抗核抗體為主的大量不同的自身抗體。臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，以病情緩解和急性發(fā)作交替為特點(diǎn)?；颊叩淖陨砜乖饕羌?xì)胞核內(nèi)的不溶性(如組蛋白、DNA)和可溶性（如核糖核蛋白）成分、細(xì)胞膜成分（如紅細(xì)胞、血小板表面抗原）、細(xì)胞內(nèi)其他成分（如磷脂）等。患者體內(nèi)的自身抗體主要有抗核抗體(ANA)、抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體、抗單鏈DNA( ssDNA

2、)抗體、抗Sm抗體、抗RNP抗體、抗SSA(Ro)抗體、抗SSB(La)抗體、抗rRNP抗體、抗磷脂抗體等。
　　 SLE的病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確，可能與遺傳、環(huán)境、雌激素等因素有關(guān)。研究證明SLE的易感性與多個(gè)基因有關(guān)。多個(gè)基因在某種條件（壞境）下相互作用而改變了正常免疫耐受性而致病。外來抗原（如病原體、藥物等）引起B(yǎng)細(xì)胞活化。在易感者因免疫耐受性減弱，B細(xì)胞通過交叉反應(yīng)與模擬外來抗原的自身抗原相結(jié)合，并將抗原遞呈給T細(xì)胞，使

3、之活化，在T細(xì)胞活化刺激下，B細(xì)胞得以產(chǎn)生大量不同類型的自身抗體，造成大量組織損傷。所以B細(xì)胞的活化在SLE發(fā)病中起重要作用。
　　 SLE中細(xì)胞因子存在表達(dá)和應(yīng)答異常，影響細(xì)胞免疫和體液免疫，組成一個(gè)復(fù)雜的免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。多種細(xì)胞因子（如TNF-a、IL-I、IFN-a）在炎癥和組織損傷中起主要作用。但大多數(shù)細(xì)胞因子的來源還不很清楚。
　　 SLE是一種免疫復(fù)合物病。免疫復(fù)合物由自身抗體和相應(yīng)的自身抗原結(jié)合而成。當(dāng)免疫復(fù)

4、合物生成過多或清除有障礙時(shí)，就會(huì)沉積于皮膚、關(guān)節(jié)和腎臟等組織器官，引起炎性反應(yīng)和免疫損傷。單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)(mononuclear phygocytesystem，MPS)由人體重要的免疫細(xì)胞組成，在固有免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，并參與特異性免疫應(yīng)答。MPS通過吞噬異物、細(xì)菌、衰老和突變的細(xì)胞以及免疫復(fù)合物，維持機(jī)體的免疫穩(wěn)態(tài)，同時(shí)活化的單核巨噬細(xì)胞能分泌大量趨化因子和炎癥因子，參與機(jī)體固有和獲得性免疫調(diào)節(jié)。由于SLE患者M(jìn)PS的吞噬功能

5、下降引起循環(huán)免疫復(fù)合物增高，因此易導(dǎo)致免疫復(fù)合物在組織器官沉積而引起免疫損傷。免疫復(fù)合物不僅參與組織損壞而且能刺激樹突細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子和活化B細(xì)胞。在狼瘡的發(fā)生發(fā)展中，免疫復(fù)合物的清除障礙和MPS功能異常起重要作用，但免疫復(fù)合物和MPS的相互關(guān)系尚未有研究。在本研究中，我們著眼于免疫復(fù)合物對(duì)MPS功能的調(diào)節(jié)作用，探討免疫復(fù)合物和MPS在SLE免疫病理中的作用及其機(jī)制。
　　 目的：通過研究免疫復(fù)合物對(duì)U937細(xì)胞和U937細(xì)胞誘

6、導(dǎo)產(chǎn)生的巨噬細(xì)胞的增殖、分泌、吞噬功能的影響以及發(fā)揮作用的機(jī)制，全面觀察免疫復(fù)合物對(duì)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)潛在調(diào)節(jié)作用，從而探討免疫復(fù)合物在SLE的發(fā)病和病情進(jìn)展中
　　 方法：U937細(xì)胞按常規(guī)方法培養(yǎng)和傳代，狀態(tài)良好的U937細(xì)胞直接用于檢測(cè)增殖和分泌功能實(shí)驗(yàn)以及機(jī)制的研究。PMA誘導(dǎo)U937細(xì)胞成巨噬細(xì)胞后用于檢測(cè)吞噬功能實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)共分六組。免疫復(fù)合物組：細(xì)胞壞死上清+系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者血清；對(duì)照組有五組：（壞死上清+

7、正常人血清）組、壞死上清組、SLE血清組、正常人血清組和培養(yǎng)基組，以上分別作用于U937細(xì)胞和U937細(xì)胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的巨噬細(xì)胞。24h后，用CCK-8法檢測(cè)U937細(xì)胞的增殖，RT-PCR法檢測(cè)U937細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子a(TNF-a)和B細(xì)胞活化因子(BAFF)的變化，中性紅比色法檢測(cè)誘導(dǎo)產(chǎn)生的巨噬細(xì)胞的吞噬功能。RAGE抗體和HMGBlAbox阻斷實(shí)驗(yàn)研究作用機(jī)制。
　　 結(jié)果：1免疫復(fù)合物能促使單核細(xì)胞的增殖，但使其吞噬能

8、力降低表明單核巨噬細(xì)胞是一種異?；罨癄顟B(tài)。
　　 2免疫復(fù)合物增加單核巨噬細(xì)胞的BAFF的分泌，表明免疫復(fù)合物通過表達(dá)大量BAFF從而活化B細(xì)胞產(chǎn)生大量自身抗體。
　　 3免疫復(fù)合物可使單核細(xì)胞TNF-a分泌增加。表明在狼瘡體內(nèi)單核細(xì)胞是大量TNF-a的來源。
　　 4抗RAGE抗體和HMGBlAbox拮抗免疫復(fù)合物的作用表明免疫復(fù)合物通過HMGBI-RAGE通路發(fā)揮作用。
　　 結(jié)論：(1)免疫復(fù)合物促