TRPV4在大鼠腦中的表達(dá)及在次聲損傷中的作用.pdf

1、研究背景：次聲是指頻率小于20Hz的聲波。次聲暴露可引起多種組織器官損害，是一種公認(rèn)的環(huán)境污染因素，并被認(rèn)為具有潛在軍事用途。次聲來(lái)源廣泛，穿透性很強(qiáng)，防護(hù)比較困難，因此有必要深入研究其作用機(jī)制。
　　研究目的：次聲頻率與組織器官固有頻率一致，二者發(fā)生共振被認(rèn)為是次聲損傷的始動(dòng)因素。但振動(dòng)做為一種機(jī)械刺激，如何轉(zhuǎn)變成生物信號(hào)并不清楚。TRPV是近年研究較多的一類通道蛋白，其不少成員能感受機(jī)械刺激，并調(diào)節(jié)組織細(xì)胞的活動(dòng)。據(jù)此，我們假

2、設(shè)，次聲可能激活某些機(jī)械感受分子，以此引起組織損傷。為給該假設(shè)提供證據(jù)支持，深入了解次聲損傷的機(jī)制，我們進(jìn)行本研究。
　　研究?jī)?nèi)容：（1）16Hz/130db次聲處理大鼠2h，之后立即提取大鼠腦組織RNA并反轉(zhuǎn)錄，設(shè)計(jì)trpv1-trpv4的特異性引物，用RT-PCR的方法對(duì)各自mRNA含量進(jìn)行定量分析，比較次聲處理對(duì)trpV轉(zhuǎn)錄的影響；（2）用WB的方法檢測(cè)大鼠次聲暴露后急性期不同時(shí)間點(diǎn)，TRPV4表達(dá)的變化趨勢(shì)；（3）在體外培

3、養(yǎng)的大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞中，用免疫熒光染色、WB和RT-PCR的方法，確定TRPV4的細(xì)胞定位；（4）構(gòu)建trpV4特異的RNAi表達(dá)載體，并用脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染U87細(xì)胞，驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率；（5）6Hz/130dB次聲處理U87細(xì)胞，在急性期的不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)U87細(xì)胞上清液MDA含量、裂解液SOD活性和裂解液GSH含量，研究次聲對(duì)U87的過(guò)氧化損傷；（6）用trpv4特異的RNAi載體瞬轉(zhuǎn)U87細(xì)胞，再次觀察上述指標(biāo)，研究

4、RNAi對(duì)次聲引起的過(guò)氧化損傷有無(wú)保護(hù)作用。
　　研究結(jié)果：（1）16Hz/130db次聲處理能顯著提高大鼠腦組織trpv4mRNA量；（2）16Hz/130db次聲處理大鼠2h，在終止次聲0.5h時(shí)間點(diǎn)TRPV4表達(dá)即可達(dá)到峰值，之后輕度下降，但到2h時(shí)間點(diǎn)時(shí)仍高于正常；（3）TRPV4在大鼠皮層神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞都有表達(dá)，其中以星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)水平最高；（4）構(gòu)建的trpv4特異的RNAi載體能有效地下調(diào)U87細(xì)

5、胞TRPV4的表達(dá)，為下一步實(shí)驗(yàn)打下基礎(chǔ)；（5）6Hz/130dB次聲處理U87細(xì)胞后，在1-4h時(shí)間點(diǎn)，上清液MDA含量都有明顯上升，裂解液SOD活性和裂解液GSH含量都有明顯下降，提示次聲對(duì)U87細(xì)胞的過(guò)氧化損傷；（6）下調(diào)U87細(xì)胞TRPV4的表達(dá)，對(duì)次聲過(guò)氧化損傷有一定的保護(hù)作用。
　　結(jié)論：TRPV4做為一種近年研究較多的機(jī)械刺激感受分子，在大鼠皮層神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞都有表達(dá),其中以星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)水平最高