體外尿道發(fā)育模型的構(gòu)建及雌激素干預(yù)研究.pdf

1、尿道下裂近年來發(fā)病率持續(xù)上升，發(fā)病機(jī)制不明，相關(guān)研究至今未有突破性進(jìn)展，由于污染導(dǎo)致的環(huán)境中雌激素樣物質(zhì)的增多被認(rèn)為是近年來尿道下裂增加的原因，本研究主要探討雌激素與尿道下裂發(fā)生之間的關(guān)系及相關(guān)機(jī)制。 1、尿道下裂模型構(gòu)建：我們用不同劑量的雌二醇(E2)給孕12.5～17.5d C57小鼠灌胃，結(jié)果顯示隨著雌激素劑量的增加，雄性后代出現(xiàn)尿道下裂的比例增加，肛門與生殖器間距離(ADG)在縮短，當(dāng)雌激素>100μg/Kg/d時(shí)，尿道

2、下裂的發(fā)生率趨于穩(wěn)定，ADG縮短比尿道下裂更早達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)；雄激素對(duì)雌激素的致畸作用有部分逆轉(zhuǎn)效應(yīng)。研究從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)角度支持了流行病學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)，雌激素可能作為一種環(huán)境內(nèi)分泌干擾物質(zhì)，是尿道下裂發(fā)病率增加的原因之一。雌激素誘導(dǎo)尿道下裂模型的構(gòu)建成功為研究尿道下裂病因?qū)W和預(yù)防干預(yù)措施提供了基礎(chǔ)。 2、生殖結(jié)節(jié)(GT)器官培養(yǎng)體外尿道發(fā)育模型的構(gòu)建：GT是陰莖的前體，E14.5d是小鼠胚胎前尿道管化發(fā)育的開始，該時(shí)期的雄性胚胎GT大

3、小<1mm3，適于體外培養(yǎng)，我們將之切下放于Millicell插入式器官型組織培養(yǎng)板微孔膜上，37℃培養(yǎng)72小時(shí)后發(fā)現(xiàn)GT在離體培養(yǎng)下出現(xiàn)了明顯的生長，其形態(tài)結(jié)構(gòu)出現(xiàn)了類似于同期體內(nèi)陰莖發(fā)育的變化，在10nM DHT存在下，GT長度增加了42％，面積增加了45.6％，尿道出現(xiàn)管化，上皮增生活躍，缺乏雄激素的存在GT明顯生長不良。我們首次建立了體外尿道發(fā)育模型，該模型因?yàn)樵隗w外建立，因此不受垂體-腎上腺-性腺軸的影響，但保留了尿道發(fā)育中上

4、皮與間充質(zhì)之間多信號(hào)多因子的相互作用和嚴(yán)格的空間因果關(guān)系，因此可以用來研究尿道下裂或陰莖發(fā)育異常等發(fā)生機(jī)制的工具。 3、雌激素干預(yù)陰莖發(fā)育的體外研究：我們以建立的生殖結(jié)節(jié)器官培養(yǎng)模型為基礎(chǔ)，按濃度梯度在培養(yǎng)液中加入E2干預(yù)，結(jié)果顯示雌激素對(duì)生殖結(jié)節(jié)的生長有抑制作用，并且具有劑量依賴性，當(dāng)雌激素濃度>100nM時(shí)，抑制作用趨向穩(wěn)定，大劑量雌激素下，尿道周圍間充質(zhì)的增值(ki67標(biāo)記)被明顯抑制，凋亡的空間特異性被明顯破壞(TUNE