油菜菌核病菌子囊盤和子囊孢子室內(nèi)誘導(dǎo)方法研究.pdf

1、油菜菌核病菌通過菌核在適宜環(huán)境中萌發(fā)產(chǎn)生子囊盤并向外彈射子囊孢子來進(jìn)行病害的傳播擴(kuò)散及侵染。獲得足夠的菌核病子囊孢子是深入研究核盤菌致病機(jī)理及篩選抗菌核病的油菜品種的一個(gè)極其重要的技術(shù)環(huán)節(jié)，自然條件中獲取子囊孢子較為費(fèi)時(shí)費(fèi)力，因此需要研究菌核病菌的室內(nèi)誘導(dǎo)萌發(fā)。已知的室內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)孢方法有多種，但是根據(jù)這些實(shí)驗(yàn)方法做出的結(jié)果與預(yù)期結(jié)果差別較大，萌發(fā)率較低，且不產(chǎn)生子囊盤，其中一些實(shí)驗(yàn)方法實(shí)施起來更是比較費(fèi)時(shí)費(fèi)力。本論文通過對(duì)比研究前人的方法

2、,對(duì)油菜菌核病菌的菌核培育、菌核萌發(fā)、子囊孢子誘導(dǎo)收集進(jìn)行了試驗(yàn)研究，旨在探索和建立一套誘導(dǎo)油菜菌核病菌有性孢子產(chǎn)生的實(shí)用有效的實(shí)驗(yàn)方法，主要結(jié)果如下：
　　1不同培養(yǎng)基對(duì)菌核大小、質(zhì)地、數(shù)量及后續(xù)萌發(fā)影響
　　本實(shí)驗(yàn)利用小麥、土豆、向日葵花盤、PDA等4種培養(yǎng)基來培育油菜菌核病菌，以期獲得大量人工培育菌核。土豆作為培養(yǎng)基培育出的菌核多為不規(guī)則或長(zhǎng)橢圓形，平均單粒菌核大小能達(dá)到1.02×0.39cm，質(zhì)地飽滿，數(shù)量多（每三角

3、瓶能培育出600粒左右菌核），并且只有土豆培養(yǎng)基培育出的菌核能夠順利萌發(fā)產(chǎn)生子囊盤。PDA培養(yǎng)基培育出的菌核產(chǎn)量低（每皿約37粒），多為圓形或扁圓形上被菌絲，并且多數(shù)菌核不成熟，易碎裂，其培育出的菌核也是最小的（平均為0.45×0.16cm），在后續(xù)萌發(fā)實(shí)驗(yàn)中，其菌核無法萌發(fā)產(chǎn)生子囊柄，只會(huì)長(zhǎng)出菌絲。小麥培養(yǎng)基培育出的菌核介于上述兩者之間，圓形居多，多數(shù)菌核生長(zhǎng)成熟，平均大小為0.72×0.28cm,其菌核只能萌發(fā)出子囊柄，并不能產(chǎn)生子

4、囊盤，為無效萌發(fā)。向日葵花盤接種困難，且被雜菌污染，無菌核產(chǎn)生。
　　2不同保濕材料對(duì)菌核4℃低溫保濕誘導(dǎo)萌發(fā)率的影響
　　本實(shí)驗(yàn)中所采用的實(shí)驗(yàn)菌株不經(jīng)過4℃低溫保濕誘導(dǎo)無法萌發(fā)產(chǎn)生子囊柄只會(huì)長(zhǎng)出菌絲。本文用蛭石、石英砂、珍珠巖、滅菌土和棉花等5種具有保濕功能的材料對(duì)菌核進(jìn)行低溫保濕誘導(dǎo)處理，處理2個(gè)月。蛭石和珍珠巖對(duì)菌核的保濕效果一般，誘導(dǎo)期間菌核不會(huì)萌發(fā)產(chǎn)生子囊柄，并且容易長(zhǎng)出菌絲。利用滅菌土對(duì)菌核低溫保濕誘導(dǎo)期間，其內(nèi)

5、部易滋生雜菌，導(dǎo)致菌核腐爛，無菌核萌發(fā)出子囊柄并有大量菌絲生成。加水后的石英砂透氣性能較低，只有部分菌核萌發(fā)產(chǎn)子囊柄，萌發(fā)率約53％。棉花鎖水性能較好，容易滅菌，且透氣性良好，在低溫誘導(dǎo)期間，菌核極易萌發(fā)產(chǎn)生子囊柄，且萌發(fā)率高達(dá)95%。低溫誘導(dǎo)期間的萌發(fā)均為無效萌發(fā)，只產(chǎn)生子囊柄不生成子囊盤，但低溫誘導(dǎo)期間不產(chǎn)生子囊柄的菌核后期18℃常溫誘導(dǎo)下也不會(huì)萌發(fā)產(chǎn)生子囊盤。
　　3不同保濕材料對(duì)菌核18℃常溫下保濕誘導(dǎo)萌發(fā)率的影響

6、　　本實(shí)驗(yàn)中利用棉花、蛭石、珍珠巖、滅菌土和濾紙等5種保濕材料對(duì)結(jié)束低溫誘導(dǎo)的菌核進(jìn)行18℃常溫下保濕誘導(dǎo)萌發(fā)，并置于光照強(qiáng)度略大于500Lux的環(huán)境中培養(yǎng)。利用濾紙、蛭石和珍珠巖這3種保濕材料保濕的菌核萌發(fā)結(jié)果相似，菌核只會(huì)萌發(fā)出子囊柄，并于3-5d后逐漸枯萎，無法產(chǎn)生子囊盤為無效萌發(fā)。滅菌土保濕的菌核在誘導(dǎo)萌發(fā)期間多數(shù)被雜菌污染腐爛，并生成大量菌絲，無子囊柄生成。同低溫誘導(dǎo)時(shí)一樣，棉花保濕性能最好，利用棉花保濕的菌核其平均有效萌發(fā)率

7、達(dá)59%。
　　4不同方法收集的子囊孢子數(shù)量及干燥性比較
　　本實(shí)驗(yàn)采用子囊孢子的自然彈射、水洗法和真空抽氣法等3種方法收集子囊孢子，結(jié)果表明，此3種收集方法都能采集到帶有活性的子囊孢子。水洗法收集到的單位面積（0.01mm2）內(nèi)平均孢子數(shù)目最多（21個(gè)），但是收集到的子囊孢子遇水后易萌發(fā)不便于保存。真空抽氣法收集到的單位面積（0.01mm2）內(nèi)平均孢子數(shù)目約為12個(gè)，僅次于水洗法，其孢子較為干燥，易于保存。自然彈射法收集到

8、的數(shù)量最少單位面積（0.01mm2）內(nèi)平均約為2個(gè)，干燥性一般次于真空抽氣法。
　　5子囊盤和子囊孢子室內(nèi)誘導(dǎo)方法的建立
　　根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，建立了一套誘導(dǎo)油菜菌核病菌有性孢子產(chǎn)生的實(shí)用有效的實(shí)驗(yàn)方法：利用土豆培養(yǎng)基培育接種純凈菌株于20℃光照下培育大量菌核，并選用棉花作為保濕材料對(duì)菌核進(jìn)行4℃低溫黑暗誘導(dǎo)，處理2月。結(jié)束低溫誘導(dǎo)后再利用棉花對(duì)菌核保濕并于18℃略大于500Lux的光照環(huán)境中保濕萌發(fā)，最后采取真空抽氣法收集