酵母菌形態(tài)觀察及其子囊孢子的觀察

1、酵母菌形態(tài)觀察及其子囊孢子的觀察酵母菌形態(tài)觀察及其子囊孢子的觀察安明玉（安明玉（200900140001200900140001）同組者：陳汶燦、陳肖然、程彬、高琳璐、秦瑤同組者：陳汶燦、陳肖然、程彬、高琳璐、秦瑤一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解酵母菌的形態(tài)及出芽方式；2.學(xué)習(xí)區(qū)分酵母菌死細(xì)胞及活細(xì)胞；3.掌握酵母菌子囊孢子的觀察方法。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理酵母菌是不運(yùn)動(dòng)的單細(xì)胞真核微生物，其大小通常比常見的細(xì)菌大幾倍甚至幾十倍，因此

2、，不必染色即可用顯微鏡觀察其形態(tài)。大多數(shù)酵母以出芽方式進(jìn)行無性繁殖，有的二分裂殖；子囊菌綱中的酵母菌在一定條件下，可產(chǎn)生子囊孢子進(jìn)行有性生殖。酵母菌子囊孢子的形成過程為：兩營養(yǎng)細(xì)胞各伸出一個(gè)小突起而相接觸，使兩個(gè)細(xì)胞結(jié)合起來，而后接觸處的細(xì)胞溶解，經(jīng)質(zhì)配和核配后，形成雙倍體核，原來的細(xì)胞形成合子。此雙倍體細(xì)胞可以進(jìn)行芽殖。在適宜條件下，合子減數(shù)分裂，雙倍體核分裂成48個(gè)單倍體核，核外再圍以原生質(zhì)逐漸形成子囊孢子，子囊孢子包含在由母細(xì)胞壁

3、演變而來的子囊(即原來的二倍體細(xì)胞)中。子囊孢子的形成與否及其數(shù)量和形狀，是鑒定酵母菌的依據(jù)之一。將釀酒酵母(Sacomycescerevisiae)從營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上移植到含有醋酸鈉和葡萄糖(或棉籽糖)的產(chǎn)孢培養(yǎng)基上，于適溫下培養(yǎng)，即可誘導(dǎo)其子囊孢子的形成。本實(shí)驗(yàn)即以釀酒酵母為材料觀察酵母菌的子囊孢子。美藍(lán)是一種弱氧化劑，氧化態(tài)呈藍(lán)色，還原態(tài)呈無色。用美藍(lán)對(duì)酵母細(xì)胞進(jìn)行染色時(shí)，活細(xì)胞由于細(xì)胞的新陳代謝作用，細(xì)胞內(nèi)具有較強(qiáng)的還原能力，

4、能將美藍(lán)由籃色的氧化態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)闊o色的還原態(tài)型，從而細(xì)胞呈無色；而死細(xì)胞或代謝作用微弱的衰老細(xì)胞則由于細(xì)胞內(nèi)還原力較弱而不具備這種能力，從而細(xì)胞呈藍(lán)色，據(jù)此可對(duì)酵母菌的細(xì)胞死活進(jìn)行鑒別。三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料1.菌種釀酒酵母(Sacomycescerevisiae)；2.試劑0.1％美藍(lán)染色液、孔雀綠染色液、95％乙醇、香柏油等；3.器材顯微鏡、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、蓋玻片、擦鏡紙、吸水紙等。四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1.配制酵母合成培養(yǎng)

5、基（見附錄），用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的酵母菌接種，培養(yǎng)7天。2.2.酵母菌死活細(xì)胞的觀察區(qū)分及出芽生殖酵母菌死活細(xì)胞的觀察區(qū)分及出芽生殖1）染色：無菌環(huán)境下，在干凈的載玻片中央加一小滴適宜濃度的釀酒酵母液體培養(yǎng)物，加一小滴0.1%美藍(lán)染色液（染色液和菌液不宜過多或過少，并應(yīng)基本等量），然后輕輕從側(cè)面蓋上蓋玻片，注意盡量不要產(chǎn)生氣泡（注意染色液和菌液不宜過多或過少，并應(yīng)基本等量）。圖3.酵母菌及其子囊孢子的觀察（10100）如圖所示，顯微鏡下觀

6、察，酵母菌子囊孢子呈藍(lán)綠色，菌體和子囊呈粉紅色。六、思考題六、思考題美藍(lán)染液作用時(shí)間的不同對(duì)酵母菌死細(xì)胞數(shù)量有何影響？是分析其原因？答：有實(shí)驗(yàn)結(jié)果可看出隨著時(shí)間的增長，酵母菌的死亡細(xì)胞逐漸增多。原因是隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長，酵母菌產(chǎn)生的酒精增多造成酵母菌死亡增多，另外營養(yǎng)物質(zhì)的減少也是原因之一。七、實(shí)驗(yàn)小結(jié)七、實(shí)驗(yàn)小結(jié)通過本實(shí)驗(yàn)我們了解酵母菌的形態(tài)及出芽方式，學(xué)會(huì)了如何區(qū)分酵母菌死細(xì)胞及活細(xì)胞，并掌握了酵母菌子囊孢子的觀察方法。酵母菌是單細(xì)