不同皮膚擴(kuò)張方式對皮瓣微血管的影響.pdf

1、目的： 通過研究不同皮膚擴(kuò)張方式中VEGF和CD31的表達(dá)，以探討適合于臨床的最佳的皮膚擴(kuò)張方式，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 材料與方法： 1 實(shí)驗動物：62只雄性新西蘭大白兔，6月齡，體重2～3Kg，由河北醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗中心提供。 2 動物分組：隨機(jī)將動物按不同擴(kuò)張方式分為5大組：A組(反復(fù)快速擴(kuò)張組)、B組(快速擴(kuò)張組)、C組(常規(guī)擴(kuò)張組)、D組(植入不擴(kuò)組)和E組(正常對照組)；A、B兩組每組20只

2、，按標(biāo)本采集時間又分為5組：分別為在擴(kuò)張完成后維持1周，2周，3周，4周，6周取標(biāo)本，每組4只動物；C組16只動物，分為4組：分別為在擴(kuò)張完成后維持1周，2周，3周，4周取標(biāo)本，每組4只動物；D組5只動物，分為5組：分別為植入擴(kuò)張器后不擴(kuò)張維持1周，2周，3周，4周，6周取標(biāo)本，每組1只動物；E組1只動物，為不植入擴(kuò)張器的正常對照組。 3 動物模型制備：實(shí)驗動物稱重，2.5g/L戊巴比妥鈉靜脈麻醉(25mg/Kg)。自兩耳根后緣

3、連線間橫行切開皮膚；在頭部皮膚與顱骨骨膜之間用血管鉗鈍性分離，植入50ml擴(kuò)張器。自術(shù)后第3天開始擴(kuò)張皮膚。A組：每日擴(kuò)張1次，每次注無菌生理鹽水20ml，維持30min，然后抽出20ml，間隔3小時，然后再注水20ml，照此反復(fù)3次，最后一次抽出15ml，以后每天重復(fù)以上的方法，10日完成注水；B組：每日擴(kuò)張1次，每次注無菌生理鹽水5ml，10日完成注水；C組：每3日擴(kuò)張1次，每次注無菌生理鹽水5ml，28日完成注水；D組：植入擴(kuò)張器

4、后不擴(kuò)張；E組：不植入擴(kuò)張器。 4 標(biāo)本采集與處理：各組到取材時間后，全麻下在擴(kuò)張皮瓣中央切取1cm×1cm大小的組織塊作為標(biāo)本。標(biāo)本投入10％甲醛液中固定，常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋，制成4μm連續(xù)切片。 5 觀察指標(biāo)及方法： 5.1大體標(biāo)本肉眼觀察； 5.2光鏡組織學(xué)觀察；5.3采用免疫組化SP法及計算機(jī)圖像分析系統(tǒng)檢測VEGF和CD31在擴(kuò)張皮瓣中的表達(dá)。 6 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件包

5、進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，以P<0.05為具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1 大體觀察：動物實(shí)驗過程中，所有實(shí)驗動物未出現(xiàn)感染、擴(kuò)張器外露、皮瓣壞死等并發(fā)癥，均成活到預(yù)定觀察時間。 2 組織學(xué)觀察：A、B、C三組在不同維持期，血管增生明顯，主要集中在真皮乳頭層、網(wǎng)狀層以及毛囊周圍。 3 微血管密度(MVD)：A、B、C三組在維持1周微血管密度均處于較高水平，隨著維持時間的延長，微血管密度呈下降趨勢，在維持4周時，微血管密

6、度位于最低水平，而后再次升高。在維持1、2、3、4周，A組的MVD明顯高于B組和C組(P<0.05，B組與C組比較無顯著性差異(P>0.05)；在維持6周，A組的MVD高于B組(P<0.05)；維持6周的A組和B組的MVD明顯高于維持4周的C組(P<0.05)。 4 VEGF的表達(dá)：A、B、C三組在維持1周VEGF的表達(dá)均處于較高水平，隨著維持時間的延長，VEGF的表達(dá)呈下降趨勢，在維持4周時，VEGF的表達(dá)接近正常皮膚的水平，

7、而后再次升高。在維持1周，A組的VEGF表達(dá)明顯高于B組和C組(P<0.05)，B組與C組差異不明顯(P>0.05)；在維持2、3、4周A組與B組、C組比較均無顯著性差異(P>0.05)；在維持6周，A組的VEGF表達(dá)與B組比較無顯著性差異(P>0.05)；維持6周的A組和B組的VEGF表達(dá)明顯高于維持4周的C組(P<0.05)。 5 VEGF與MVD的關(guān)系：VEGF陽性細(xì)胞的分布與血管分布高度一致。VEGF的陽性表達(dá)與MVD