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文檔簡介
1、單核細胞趨化因子-1(MCP-1)是一種一般表達于白細胞的趨化蛋白,在正常神經(jīng)組織內(nèi)極少表達,近來研究發(fā)現(xiàn)此類細胞因子在神經(jīng)損傷后表達增加。以往實驗證實MCP-1在慢性壓迫背根神經(jīng)節(jié)疼痛模型(CCD)上表達增多,并且MCP-1能夠引起DRG細胞去極化,提示MCP-1/CCR2信號系統(tǒng)可能參與神經(jīng)病理性疼痛痛覺過敏的形成,但其機制尚不十分清楚。本課題在慢性壓迫背根神經(jīng)節(jié)的模型上,首先使用免疫熒光染色的技術(shù)明確CCD術(shù)后CCR2受體的表達及
2、分布,在此基礎(chǔ)上,使用行為學測試的方法觀察MCP-1對CCD大鼠痛覺行為的作用,并使用電生理技術(shù)探討了MCP-1可能通過易化P2X3受體功能起作用。主要實驗結(jié)果如下: 1.行為學測試結(jié)果顯示MCP-1能夠引起CCD大鼠的自發(fā)痛覺行為。表現(xiàn)為注射MCP-1后,大鼠自發(fā)抬腿次數(shù)以及時間增加,并且對機械刺激有反應(yīng)的閾值降低。 2.免疫熒光染色顯示CCD神經(jīng)元上MCP-1主要的受體CCR2表達增加。細胞內(nèi)游離鈣離子測定表明,MC
3、P-1的能夠引起細胞內(nèi)鈣離子增加,說明在急性分離的CCD神經(jīng)元上表達的CCR2具有功能。 3.使用全細胞膜片鉗的方法檢測CCD神經(jīng)元靜息膜電位平均-52.85±5.24mV,對照組(假手術(shù)組)靜息膜電位平均55.46±0.80mV,細胞內(nèi)記錄CCD神經(jīng)元閾電流為304.29±38.52pA,正常對照組神經(jīng)為464.71±66.14pA。提示CCD術(shù)后,DRG神經(jīng)元興奮性增強。此外MCP-1的能夠降低CCD的神經(jīng)元的閾電流水平。這
4、些結(jié)果表明,CCD神經(jīng)元興奮性增高可能是由于MCP-1/CCR2信號系統(tǒng)的上調(diào)所致。 4.免疫組織化學顯示,CCR2與P2X3受體在某些DRG神經(jīng)元上共存。全細胞膜片鉗記錄結(jié)果顯示,P2X3受體激動劑α,β,me-ATP可誘發(fā)一大的內(nèi)向電流,預(yù)給藥MCP-1 1min可顯著增強α,β,me-ATP誘發(fā)的電流強度;使用共聚焦顯微鏡活細胞內(nèi)鈣離子測定,MCP-1增強α,β,me-ATP誘發(fā)的細胞內(nèi)鈣熒光強度;行為學測試結(jié)果顯示,MC
5、P-1增強α,β,me-ATP誘發(fā)的自發(fā)性痛覺反應(yīng),并且與注射對照藥物組大鼠相比MCP-1注射組α,β-meATP引起的大鼠機械痛閾值下降幅度更加明顯。這些結(jié)果提示:MCP-1還可能通過易化P2X3受體功能參與CCD術(shù)后痛覺過敏的病理形成。 綜上所述,通過研究MCP-1/CCR2信號系統(tǒng)在神經(jīng)病理性疼痛中的作用,證明在CCD模型上MCP-1/CCR2信號系統(tǒng)是引起痛覺過敏的重要原因之一,它能夠通過增強神經(jīng)元興奮性以及易化易化DR
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