PD-1-PD-L1途徑在膿毒癥T淋巴細胞和單核細胞中的作用及機制研究.pdf

1、膿毒癥(sepsis)是一種創(chuàng)傷、感染等引起機體過激的炎癥反應(yīng)從而對人體產(chǎn)生嚴重危害的疾病，死亡率極高。近年來，隨著科學(xué)家對膿毒癥的深入研究，發(fā)現(xiàn)其病程變化中免疫系統(tǒng)的功能障礙是膿毒癥中的一個突出問題。膿毒癥過程中，機體非特異免疫系統(tǒng)過度活化，同時特異性免疫系統(tǒng)功能障礙，出現(xiàn)以T細胞反應(yīng)性降低或無反應(yīng)狀態(tài)為特征的免疫抑制。免疫抑制主要表現(xiàn)在遲發(fā)超敏反應(yīng)喪失、病原清除能力下降、易發(fā)生繼發(fā)感染等。這其中淋巴細胞的凋亡、單核細胞功能異常是一個

2、重要的原因，但是其發(fā)生機制尚未清楚。為此，本實驗旨在研究淋巴細胞凋亡及單核細胞功能異常的機制，找出其病理生理變化過程中的關(guān)鍵問題，并尋求合理的治療靶點。
　　 PD-1(programmed death-1)是一個相對分子質(zhì)量為55kDa的免疫球蛋白超家族Ⅰ型跨膜糖蛋白，能夠與B7家族分子PD-L1和PD-L2結(jié)合。PD-1可表達于T細胞、B細胞、髓系細胞和胸腺細胞側(cè)，提示PD-1在免疫調(diào)節(jié)方面有著廣泛的作用。并且PD-1/PD

3、-L1途徑在慢性病毒感染、炎癥、腫瘤免疫、自身免疫性疾病等方面扮演著重要的角色，提示我們PD-1/PD-L1途徑可能有希望作為今后一個治療上述相關(guān)疾病的靶點。
　　 本實驗旨在研究PD-1/PD-L1途徑對膿毒癥T淋巴細胞凋亡以及單核細胞功能的作用，為膿毒癥的治療探尋新的有效靶點。在本實驗中，通過流式細胞術(shù)檢測我們發(fā)現(xiàn)膿毒癥患者T淋巴細胞表面PD-1水平以及單核細胞表面PD-L1水平較正常人顯著升高，并且與病情嚴重程度有相關(guān)性，

4、病情好轉(zhuǎn)出院的患者的PD-1和PD-L1水平下降到比較低的水平，而病重死亡的患者PD-1和PD-L1水平卻上升到很高的水平。為了研究這條途徑對淋巴細胞以及單核細胞的作用，我們對PD-1/PD-L1途徑在體外進行阻斷，研究T細胞凋亡以及單核細胞功能的變化，實驗結(jié)果顯示用抗PD-L1抗體阻斷PD-1/PD-L1途徑后能夠在TNF-α、TCR兩條誘導(dǎo)凋亡途徑中降低T淋巴細胞的凋亡率。同時，阻斷PD-1/PD-L1途徑后還能夠提高單核細胞的機能

5、，使細胞在LPS刺激后分泌細胞促炎因子的水平增加，抗炎因子的水平降低。
　　 隨后我們采用盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)致膿毒癥小鼠模型進行體內(nèi)實驗，進一步驗證了同樣的結(jié)果。阻斷了PD-1/PD-L1途徑后，改善了CLP小鼠外周血、脾、胸腺、肺細胞的凋亡情況，提高CLP小鼠血清中促炎因子的水平，降低了抗炎因子的水平，即對單核細胞的功能有所恢復(fù)。另外也提高了CLP小鼠的生存率。并且我們對治愈的CLP小鼠進行了外周血PD-1和PD-L1表達