PD-1-PD-L1通路在原發(fā)性膽汁性膽管炎免疫機(jī)制中的作用.pdf

1、目的：探究程序性死亡受體-1（Programmed death-1，PD-1）及其配體1(PD-1ligand1，PD-L1)在原發(fā)性膽汁性膽管炎（Primary Biliary Cholangitis，PBC）免疫機(jī)制中的作用。
　　方法：收集PBC患者外周血和肝臟病理標(biāo)本，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PD-1在PBC患者CD8+T細(xì)胞和Treg細(xì)胞的表達(dá)情況，免疫熒光共定位檢測(cè)PD-L1在肝臟膽管細(xì)胞表達(dá)情況，ELISA測(cè)定血漿中PD-1/

2、PD-L1通路相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平，RT-PCR法測(cè)定CD8+T淋巴細(xì)胞中PD-1/PD-L1通路相關(guān)調(diào)控通路的表達(dá)。通過(guò)體外細(xì)胞共培養(yǎng)，探究PD-1/PD-L1通路調(diào)控在CD8+細(xì)胞毒細(xì)胞中對(duì)PBC靶細(xì)胞人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞殺傷作用中的作用。
　　結(jié)果：本研究共入組就診于北京協(xié)和醫(yī)院的PBC患者69例，健康對(duì)照者58例。PBC患者外周血CD8+T淋巴細(xì)胞PD-1表達(dá)（12.0±8.8％）比健康對(duì)照（19.9±12.5％）降低(p＜

3、0.001)，PBC患者Treg細(xì)胞比例（5.6±3.7％）較健康對(duì)照（7.4±2.4％）顯著下降(p=0.005)，且PD-1+細(xì)胞占FoxP3+CD4+T細(xì)胞比例顯著升高（29.9±11.8％v.s.25.8±8.1％，p=0.044）。PBC組血漿IL-10濃度、IFN-γ濃度、TGF-β濃度高于健康對(duì)照（IL-108.29±9.00pg/ml v.s.4.43±5.08pg/ml，p=0.0066;IFN-γ51.94±52.9

4、4pg/ml v.s.26.71±26.26pg/ml,p=0.0015;TGF-β1302.0±1972.8pg/ml v.s.205.8±298.9pg/ml，p=0.0018）。RT-PCR測(cè)定發(fā)現(xiàn)PBC組(n=21)較健康對(duì)照組(n=19)CD8+T淋巴細(xì)胞Tbet基因表達(dá)量升高（3.03±4.23v.s.0.82±0.76，p=0.028），Pdcd1基因表達(dá)有下降趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（0.59±0.73v.s.1.49±2.

5、20，p=0.110）。肝臟免疫熒光共定位發(fā)現(xiàn)，PBC患者組肝臟內(nèi)PD-L1陽(yáng)性細(xì)胞較少，未見膽管細(xì)胞與PD-L1雙陽(yáng)性細(xì)胞。在與HiBEC共培養(yǎng)體系中，PD-1+CD8+T細(xì)胞較PD-1-CD8+T細(xì)胞細(xì)胞毒殺傷能力弱，增殖下降，TGF-β、IFN-γ有下降趨勢(shì)，且靶細(xì)胞凋亡相對(duì)較少，這種效應(yīng)在一定程度上可以被抗PD-1抗體拮抗，而在PD-L1促進(jìn)下有所增強(qiáng)。
　　結(jié)論：在PBC的發(fā)病的免疫機(jī)制中，PD-1上游核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子Tbe