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1、ConstructionofoverexpressionvectorofandRrAATandgenetictransformationstudyinRosarugosabyWangJiaSupervisedbyAssociateProfessorShengLixiaADissertationSubmittedtoYangzhouUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsforTheM
2、asterDegreeofAgriculturalScienceDecember20152揚(yáng)州大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractRose(RosarugosaThunb)isthetraditionalflowerthatusedtoextractessentialoilThemaincomponentsofroseessentialoilarecitronellol，geraniolmonoterpenealcoholsanditset
3、hylesterderivativesCitronellylacetate，geranylacetateactPreviousresearchfindings1deoxyDxylulose5phosphateReductoisomerase(RrDXR)andalcoholacyl(RrAA7)transferasegenesarethekeygenesforthesynthesisofmonoterpenesflowerfragran
4、ceinRosarugosaThisstudyconstructtheoverexpressionvectorsofthesetwogenes，establishPetuniaEAGLEregenerationsystemandthegenetictransformationsystemLaythefoundationforvalidationthetwogenes’functionthroughthemethodthatAgrobac
5、teriumtumefaciensmediatedtransforinationofPetunia。Atthesametimethemainresultsareasfollows：1Thefullopeningpetalof‘Tanghong’WasusedtoextracttotalRNAbytheCTABmethodAfterobtainthetargetgene，wesuccessfullyconstructedthetwogen
6、e’SoverexpressionvectorforpCAMBIAl304DXRandpCAMBIAl304AATThenintroducedintoAgrobacteriumtumefaciensEHA105andpreservedTolaythefoundationforthenextstudy：thetargetgenesTransformateintopetuniaandverifyitsfunction2WegotthePet
7、uniaEAGLEsterilematerialviadirectseedingofsterileseedsintoMSmediumThroughusingdifferentsterilizationmethods，addingdifferentconcentrationofhormonecombinationSelectedthebeststerilizationmethodandculturemediuminducedwhichin
8、ducedPetuniacallusdifferentiationEstablishtheregenerationsystemofPetuniaTheexperimentalresultsshowedthatthebeststerilizationmethodWas75％alcoholdisinfection，thehighestgerminationratewas9333％，thebestcallusinductionmediumwa
9、sMSI5mg／L6BA02mg／LNAA309／Lsucrose79／Lagar，pH58；theoptimalrootingmediumWasI／2MS309／Lsucrose79／Lagar，pH583ThetestwasonthebasisofPetuniaEAGLEregenerationsystemThebestformulawasselectedfromthegenetictransformationsystemHygco
10、ncentrationofantibioticsfordifferentiationofcallusinductioninleaveswas5mg／L；Hygconcentrationofantibioticsfortherootingmediumwas3mg／L；Cefconcentrationofantibioticsforantibacterialwas300mg／LIntheexperiment，thetransformatio
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