大劑量甲氨蝶呤分別聯(lián)合順鉑、表阿霉素抑制MG-63骨肉瘤細(xì)胞效果的比較.pdf

1、目的：大劑量甲氨蝶呤（High dose methotrexate,HDMTX）與順鉑（Cisplatin，DDP）聯(lián)用是治療骨肉瘤有效的方案之一。通過比較HDMTX聯(lián)用DDP與HDMTX聯(lián)用表阿霉素（Epirubicine,EPI）對(duì)MG－63人骨肉瘤細(xì)胞的毒性作用，判斷后者是否也能達(dá)到較好的效果。 方法：實(shí)驗(yàn)分別用HDMTX、DDP、EPI單藥和HDMTX＋DDP、HDMTX＋EPI雙藥作用于MG-63骨肉瘤細(xì)胞，誘導(dǎo)其調(diào)亡

2、和壞死。根據(jù)藥物的血峰濃度（peak serum concentration，PSC）共設(shè)計(jì)10個(gè)實(shí)驗(yàn)組：⑴MTX 100PSC（HDMTX）；⑵DDP PSC；⑶DDP 10PSC；⑷EPI PSC；⑸EPI 10PSC；⑹HDMTX＋EPI PSC；⑺HDMTX +EPI 10PSC；⑻HDMTX+DDP PSC；⑼HDMTX+DDP 10PSC；⑽不加藥對(duì)照組。利用光學(xué)顯微鏡觀察不同藥物組作用之后細(xì)胞的一般形態(tài)變化；通過M

3、TT比色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞對(duì)不同藥物組的藥物敏感性，計(jì)算其活性抑制率：抑制率（％）=（1－加藥組平均OD值/對(duì)照組平均OD值）×100％；通過BrdU標(biāo)記酶聯(lián)免疫吸附方法檢測(cè)不同藥物組對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響，計(jì)算各組的增殖抑制率，抑制率％=（1－試驗(yàn)組OD平均值/對(duì)照組OD平均值）×100％；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同藥物組作用之后細(xì)胞的調(diào)亡率。上述實(shí)驗(yàn)最終結(jié)果均用金氏公式：Q=Ea+b/(Ea + Eb – Ea×Eb)分析判斷合并用藥后的效應(yīng)并與

4、單藥組做比較，在細(xì)胞學(xué)水平上初步比較HDMTX聯(lián)用DDP與聯(lián)用EPI對(duì)MG－63骨肉瘤細(xì)胞毒性作用的差異。 結(jié)果：加入藥物作用于MG-63細(xì)胞24小時(shí)后觀察：光鏡下可見對(duì)照組細(xì)胞呈長梭形或三角形，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，貼壁牢；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞皺縮成圓形，細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊，懸浮于培養(yǎng)液中，且藥物高濃度組和兩藥聯(lián)用組其細(xì)胞變小、變圓、漂浮的比例明顯增多；HDMTX＋EPI組比HDMTX＋DDP組的變化更明顯；MTT比色實(shí)驗(yàn)顯示HDMTX分別與DDP、

5、EPI聯(lián)用時(shí)對(duì)細(xì)胞活力的抑制都有協(xié)同作用（Q值＞0.85）。HDMTX +EPI組比HDMTX +DDP組對(duì)MG-63細(xì)胞活力的抑制作用更強(qiáng)（低濃度組44.65±1.5％ vs 26.56±1.8％，p＜0.01；高濃度組72.96±0.7％ vs 58.98±0.6％，p＜0.01），；BrdU標(biāo)記法的結(jié)果顯示HDMTX和DDP聯(lián)用對(duì)MG-63細(xì)胞增殖能力的影響為協(xié)同（Q值＞0.85），雖然HDMTX與EPI聯(lián)用后作用發(fā)生拮抗（Q值＜

6、0.85），但是仍然能獲得較高的抑制率（69.65±2.9％，80.99±2.0％）；流式細(xì)胞儀檢測(cè)的結(jié)果顯示HDMTX和DDP聯(lián)用與和EPI聯(lián)用在誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡方面都有協(xié)同作用（Q值＞0.85），結(jié)果與MTT比色實(shí)驗(yàn)的一致。 結(jié)論：體外實(shí)驗(yàn)顯示，在對(duì)MG-63骨肉瘤細(xì)胞活力抑制和誘導(dǎo)調(diào)亡方面HDMTX與EPI或DDP聯(lián)用都有協(xié)同作用；在對(duì)抑制MG-63細(xì)胞增殖能力方面HDMTX與EPI聯(lián)用后作用雖然為拮抗，但仍可達(dá)到較高的抑制率