三氧化二砷聯(lián)合順鉑抗人骨肉瘤細(xì)胞株MG-63的試驗(yàn)研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文三氧化二砷聯(lián)合順鉑抗人骨肉瘤細(xì)胞株MG-63的試驗(yàn)研究姓名：李宗鋒申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師：頡玉欣20050301中 文 摘 要期分析和細(xì)胞凋亡檢測(cè): 常規(guī)消化細(xì)胞， 制成 1 x 1 0 6 / m l 單細(xì)胞懸液， 冷 P B S 洗兩次， 按試劑盒操作說(shuō)明 進(jìn)行染色， 應(yīng)用流式細(xì) 胞儀 檢測(cè)。 5 . 細(xì) 胞內(nèi) 谷 朧甘 膚 ( G l u t a t h i o n e , G

2、S H ) 含 量 及 谷 膚 甘 膚S 一 轉(zhuǎn) 移 酶 ( G l u t a t h i o n e S - t r a n s f e r a s e s , G S T ) 活力測(cè)定: MG - 6 3 細(xì)胞經(jīng)四組藥物分別作用 4 8 小時(shí)，收集細(xì)胞，超聲破碎細(xì)胞， 離心取上清，分別以 G S H還原酶循環(huán)法和分光光度法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)G S H含量及G S T活力。 6 . 細(xì)胞B c l - 2 , B a x蛋白表達(dá)情況測(cè)定

3、: MG - 6 3 細(xì)胞經(jīng)四組藥物分別作用 4 8小時(shí)，收集細(xì)胞 ，冷 P B S洗兩次，調(diào)整細(xì)胞濃度為1 x 1 0 6 / m l ，按試劑盒操作說(shuō)明，異硫氰酸熒光素 ( F I T C ) 標(biāo)記的 抗B c l - 2 或B a x 單 抗標(biāo)記 細(xì) 胞， 以I g G I - F I T C 標(biāo)記 的 細(xì)胞為陰性對(duì)照， 然后上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。結(jié)果: M T T 法測(cè)定 C D P 和A s 2 0 3 對(duì)M G - 6 3 細(xì)胞

4、的I C 5 o 分 別 為1 . 1 3 g g / m l 和2 . 1 5 g m o l / m l , I C s 。 濃 度 的A s 2 0 3 , I C 5 o濃度的C D P , 1 / 2 1 C 5 o ( C D P ) + 1 / 2 l C 5 0 ( A S 2 0 3 ) 對(duì)M G - 6 3細(xì) 胞的 抑 制 率 分 別 為 ( 5 2 . 2 0 士 0 . 1 9 ) % , ( 5

5、 7 . 1 1 士 0 . 6 4 ) % ,( 7 1 . 1 0 士 0 . 2 5 ) % o A O / P I 雙熒光 染 色 觀察顯 示， 對(duì) 照組 細(xì) 胞呈現(xiàn)彌散均勻的黃綠色熒光， 細(xì)胞邊緣整齊， 中晚期凋亡細(xì)胞呈桔紅色。 對(duì)照組、 A 5 2 0 3 組、 C D P 組及兩藥聯(lián)合應(yīng)用組細(xì)胞 凋 亡 比 率 分 別 為 ( 3 . 2 0 士 0 . 9 0 ) % , ( 2 1 . 3 3 士 1 . 5

6、8 ) % ,( 2 5 . 5 3 1 1 . 8 3 ) % , ( 3 7 . 8 0 1 1 . 7 3 ) % o D N A 瓊脂 糖 凝 膠電 泳表明 ，經(jīng)A S 2 0 3 和C D P 處理可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞D N A呈明顯的梯形條帶， 聯(lián)合應(yīng)用組更為明顯。 流式細(xì)胞儀檢測(cè)， 在D N A直方圖上， 各組均有凋亡峰出現(xiàn)，對(duì)照組、 A s 2 場(chǎng)組、 C D P 組和聯(lián) 合 應(yīng) 用 組 的 細(xì) 胞 凋 亡 率 分 別 為