TRAIL與阿霉素聯(lián)合應(yīng)用誘導(dǎo)骨肉瘤細胞株MG-63凋亡的實驗研究.pdf

1、目的：腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL）是腫瘤壞死因子家族的成員，它可以選擇性誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡面對正常組織細胞無明顯的毒副作用，在腫瘤治療方面有著良好的前景和潛在的應(yīng)用價值。但一些腫瘤對TRAIL并不敏感，因而目前的研究傾向于TRAIL與放化療聯(lián)合應(yīng)用。本實驗以體外培養(yǎng)的人骨肉瘤細胞株MG-63為模型，觀察TRAIL對

2、MG-63細胞抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡的效應(yīng)，判斷TRAIL與臨床上常用的化療藥阿霉素聯(lián)合應(yīng)用是否具有協(xié)同作用，并初步分析其可能的作用機制，以期為骨肉瘤的治療提供新的策略。 方法：將MG-63細胞用含10%小牛血清的DMEM（含非必需氨基酸）培養(yǎng)基置于37℃、5%CO2孵箱內(nèi)常規(guī)培養(yǎng)。取對數(shù)生長期的細胞，采用MTT比色法分析TRAIL與阿霉素單獨作用和聯(lián)合作用時骨肉瘤MG-63細胞的抑制率及存活率：利用倒置相差顯微鏡觀察細胞凋亡的形態(tài)

3、變化；用流式細胞儀（FCM）檢測細胞凋亡率；半定量RT-PCR方法檢測DR4、DR5、Caspase-8和Bcl-2 mRNA基因表達變化；實驗數(shù)據(jù)用SPSS13．0軟件分析。 結(jié)果：MTT和FCM結(jié)果表明TRAIL和阿霉素對骨肉瘤MG-63細胞的活性均有抑制作用，二者合用可以協(xié)同抑制細胞活性和誘導(dǎo)凋亡。倒置相差顯微鏡觀察，TRAIL組作用24小時后部分細胞變小，變圓，而聯(lián)合用藥組還可見細胞胞膜彎曲，胞質(zhì)濃縮，及細胞破裂死亡的碎

4、片。半定量RT-PCR結(jié)果顯示：聯(lián)合應(yīng)用組DR4、DR5和caspase-8的mRNA的表達增加，與TRAIL單用組具有顯著差別（P<0．05）；Bcl-2的mRNA表達量無明顯變化（P>0．05）。 結(jié)論： 1、TRAIL可以通過凋亡的方式抑制體外培養(yǎng)的骨肉瘤細胞株MG-63增殖，并存在著一定的劑量依賴關(guān)系。 2、TRAIL與ADM聯(lián)合應(yīng)用對誘導(dǎo)MG-63細胞凋亡具有協(xié)同作用。 3、TRAIL與ADM聯(lián)