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1、目的:研究PRIMA-1對(duì)人骨肉瘤細(xì)胞珠MG-63的增殖和凋亡的影響,并探討其可能發(fā)生的機(jī)制. 方法:分別以50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml的PRIMA-1與P53突變型人骨肉瘤細(xì)胞MG-63共培養(yǎng)48/小時(shí).相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)變化,采用MTT法檢測(cè)PRIMA-1對(duì)細(xì)胞MG63增殖的影響,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡發(fā)生率,同時(shí)逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)Bax
2、mRNA、PUMA mRNA、bcl-2 mRNA的變化,Western-Bloting檢測(cè)P53、P53Serl5、Bax、PUMA、Caspase-3、Caspase-9蛋白表達(dá)變化情況. 結(jié)果:分別以50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml的PRIMA-1與P53突變型人骨肉瘤MG-63細(xì)胞共培養(yǎng)48小時(shí)后,相差顯微鏡下見死細(xì)胞逐漸增多,活細(xì)胞逐漸變少,細(xì)胞分布稀疏,細(xì)胞內(nèi)碎片
3、增多.MTT法檢測(cè)PRIMA-1抑制人骨肉瘤MG.63細(xì)胞增殖的抑制率分別為(3.6±0.8)﹪、(15.2±1.2)﹪、(50.1±2.3)﹪、(63.3±3.5)﹪、(68.7±4.3)﹪(P<0.05);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞早期調(diào)亡百分率分別為(45.2.1±2.8)﹪、(36.5±3.8)﹪、(27.1±3.1)﹪(11.7±0.6)﹪和(3.4﹪4±0.3)﹪,晚期調(diào)亡百分率分別為(11.4±1.1)﹪(12.6±1.9)﹪、(
4、13.9±1.6)﹪、(24.2+2.5)﹪、(40.4±3.6)﹪(P<0.05).逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)顯示Bax mRNA、PUMAmRNA表達(dá)均增高,bcl-2-mRNA表達(dá)明顯降低.Western-Bloting檢測(cè)到P53、P53Serl5、Bax、PUMA、Caspase-3、Caspase-9表達(dá)明顯上調(diào),而bcl-2表達(dá)明顯下調(diào). 結(jié)論:PRIMA-1在體外能顯著抑制P53突變型人骨肉瘤細(xì)胞MG-6
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