茉莉酸甲酯聯(lián)合順鉑抑制人骨肉瘤MG-63細(xì)胞增殖作用的研究.pdf

1、背景與目的：
　　骨肉瘤是臨床上常見的惡性腫瘤，目前其治療方式主要是手術(shù)聯(lián)合藥物化療。然而傳統(tǒng)化療藥物副作用多，對患者二次傷害巨大，因此尋找低毒的新型天然抗癌藥物具有重大意義。早期研究發(fā)現(xiàn)茉莉酸甲酯（Methyl Jasmonate,MEJA）在植物界普遍存在且具有重要生理功能，參與細(xì)胞生長發(fā)育各個過程。目前研究表明MEJA可以抑制多種腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡。因此本實(shí)驗(yàn)擬采用MEJA聯(lián)合順鉑（Cisplatin,CDDP）來初步

2、探討其對人骨肉瘤MG-63細(xì)胞增殖抑制作用及作用機(jī)制。
　　方法：
　　（1）實(shí)驗(yàn)分4個組：空白對照組、MEJA組、CDDP組和MEJA＋CDDP藥物聯(lián)合組；
　?。?）采用不同濃度梯度MEJA與CDDP單獨(dú)及聯(lián)合作用于MG-63細(xì)胞，倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；
　?。?）Hoechst33342核染色法及AnnexinV-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率；
　　（4）RT-PCR檢測Cas

3、pase-3、Bcl-2mRNA表達(dá)情況；Western blotting檢測cleaved Caspase-3、Bcl-2在蛋白水平的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　?。?）顯微鏡下見對照組腫瘤細(xì)胞生長良好，而各濃度梯度藥物組細(xì)胞則表現(xiàn)為不同程度的凋亡狀態(tài)，可見部分細(xì)胞脫落降解，貼壁細(xì)胞密度降低，部分脫落細(xì)胞形態(tài)由梭形變圓，變小，細(xì)胞間距增大，胞內(nèi)顆粒增多，鏡下見同一濃度梯度中兩單藥組凋亡細(xì)胞數(shù)量大致相同，聯(lián)合組較單藥組凋亡細(xì)胞

4、數(shù)量更為顯著，且上述現(xiàn)象隨著藥物濃度的增加而更加明顯；
　　（2）Hoechst33342
　　核染細(xì)胞凋亡熒光檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：對照組中，腫瘤細(xì)胞呈均勻的淺藍(lán)色熒光，而單藥組中細(xì)胞核呈致密濃染的凋亡特征的腫瘤細(xì)胞數(shù)量增多，細(xì)胞核染成碎塊狀強(qiáng)白光，聯(lián)合組效果更顯著；
　　（3）流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示:對照組腫瘤細(xì)胞凋亡率為8.18±1.24％，M EJA組腫瘤細(xì)胞凋亡率為27.98±2.76%，CDDP組腫瘤細(xì)胞凋亡率為3

5、1.99±3.6%， MEJA＋CDDP藥物聯(lián)合組腫瘤細(xì)胞凋亡率為45.77±2.76%。兩單藥組腫瘤細(xì)胞凋亡率較對照組高，而聯(lián)合組腫瘤細(xì)胞凋亡率明顯高于單藥組及對照組；
　?。?）RT-PCR及Western blotting結(jié)果表明：藥物組較對照組而言，Bcl-2表達(dá)量下降而Caspase-3表達(dá)量增加，聯(lián)合組這一現(xiàn)象更為顯著。
　　結(jié)論：
　　MEJA聯(lián)合CDDP可以協(xié)同抑制MG-63細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，而ME