α-MSH對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞CD14、TLR4和SOCS-3 mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、　　目的：CD14和TLR4(Toll-like receptor 4)是LPS(Lipopolysaccharide)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中至關(guān)重要的受體。細(xì)胞因子信號(hào)抑制劑(suppressors of cytokine signaling,SOCS)具有負(fù)性調(diào)節(jié)LPS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。α-黑色素細(xì)胞刺激素(α-melanocyte-stimulating hornone,α-MSH)具有很強(qiáng)的抗LPS功能,但是確切的作用機(jī)制還不清楚。本實(shí)驗(yàn)主

2、要觀(guān)察α-MSH對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞NO釋放及CD14、TLR4和SOCS-3 mRNA表達(dá)的影響,進(jìn)一步揭示α-MSH抗LPS的作用機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)采用半定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測(cè)LPS誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞CD14、TLR4和SOCS-3 mRNA表達(dá)水平及給予α-MSH后對(duì)CD14、TLR4和SOCS-3基因表達(dá)的影響；同時(shí)留取細(xì)胞培養(yǎng)液上清,用Griess試劑檢測(cè)LPS誘導(dǎo)的小鼠腹

3、腔巨噬細(xì)胞NO生成量的變化和α-MSH對(duì)其影響。
　　結(jié)果：未受刺激的正常小鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放少量NO；LPS刺激后NO的生成量顯著增加(P<0.01),若同時(shí)給與α-MSH后,LPS誘導(dǎo)NO的生成作用則完全被阻斷(P<0.01)。正常靜息小鼠腹腔巨噬細(xì)胞只表達(dá)少量的CD14和TLR4 mRNA,給予LPS刺激后6h,兩者表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.01),并且其表達(dá)量隨著LPS刺激時(shí)間的增加維持在高水平,24h達(dá)到峰值,在48h CD

4、14 mRNA的表達(dá)恢復(fù)到正常細(xì)胞的基線(xiàn)水平,而TLR4 mRNA的表達(dá)仍然維持在高水平。若LPS(10ug/mL)刺激的同時(shí)給予α-MSH,CD14和TLR4 mRNA的表達(dá)則明顯被抑制(P<0.05),而且α-MSH這種效應(yīng)還與其使用濃度有關(guān),0.1nmol/Lα-MSH不影響LPS誘導(dǎo)的CD14和TLR4 mRNA的表達(dá),但當(dāng)α-MSH的濃度達(dá)到1、10、100nmol/L則能顯著抑制CD14和TLR4 mRNA的表達(dá)(P<0.0

5、5),但各個(gè)濃度組之間的抑制作用沒(méi)有差別(P>0.05)。另外,在未受刺激小鼠腹腔巨噬細(xì)胞SOCS-3 mRNA有低水平的表達(dá)；10μg/mL LPS作用3h,SOCS-3 mRNA的表達(dá)明顯高于正常對(duì)照組(P<0.01)；若同時(shí)給予α-MSH,SOCS-3 mRNA的表達(dá)則顯著低于LPS組(P<0.01)。單獨(dú)給予α-MSH刺激的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,NO釋放及CD14、TLR4和SOCS-3 mRNA表達(dá)與空白對(duì)照組沒(méi)有差異(P>0.0

6、5)。
　　結(jié)論：α-MSH抗LPS的效應(yīng)與其干擾LPS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)鍵受體的表達(dá)有關(guān)。LPS在啟動(dòng)炎癥的過(guò)程中可能通過(guò)TLR4激活SOCS-3介導(dǎo)的負(fù)調(diào)節(jié)機(jī)制,而α-MSH登南大學(xué)碩士學(xué)位論文。一MsH對(duì)LPs誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞CD14、TLR4和SOCS一3 mRNA表達(dá)的影響可能由于抑制CD14、TLR4 mRNA的表達(dá)而下調(diào)SocS一3 mRNA的表達(dá),說(shuō)明Q一MSH的抗內(nèi)毒素作用不是通過(guò)SocS蛋白介導(dǎo)的。a一MSH可