亞低溫對大鼠全腦缺血再灌注損傷后海馬CA1區(qū)P-JNK、C-JUN蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:研究大鼠全腦缺血再灌注損傷后海馬CA1區(qū)P-JNK、C-JUN蛋白的表達(dá)與該區(qū)缺血性神經(jīng)元凋亡的關(guān)系及亞低溫對缺血性神經(jīng)元凋亡和P-JNK、C-JNK蛋白表達(dá)的影響，探討亞低溫對腦缺血再灌注損傷可能的保護(hù)機(jī)制。 方法:采用四血管阻斷法建立大鼠全腦缺血模型。雄性成年SD大鼠144只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(SH組，n=48)、常溫組(IR組，n=48)和亞低溫組(HIR組，n=48)。SH組：暴露枕后三角和分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，不電凝

2、椎動(dòng)脈和夾閉血管，維持正常體溫(36.5-37.5℃)。IR、HIR.組：電凝阻斷兩側(cè)椎動(dòng)脈(VA)血流，無創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈阻斷血流15 min松開動(dòng)脈夾恢復(fù)腦血流灌注，HR組再灌注時(shí)維持正常體溫(36.5-37.5℃)，HIR組再灌注即刻降溫，8至10 min之內(nèi)使腦溫降至32.5-33.5℃，維持此溫度3h。各組設(shè)缺血再灌注后6h、12h、1d、3d 4個(gè)時(shí)間點(diǎn)，各組每一時(shí)間點(diǎn)各12只(n=12)，其中6只行蘇木素-伊紅(H

3、E)染色觀察各時(shí)間點(diǎn)海馬CA1區(qū)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化和TUNEL法檢測海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡，6只免疫印跡檢測P-JNK、C-JUN蛋白表達(dá)。 結(jié)果: 1.HE染色結(jié)果：IR組和HIR組于全腦缺血再灌注后6h，HE染色未見明顯改變，IR組缺血再灌注1d時(shí)CA1區(qū)出現(xiàn)嚴(yán)重改變，3d時(shí)損傷最嚴(yán)重，出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目減少，細(xì)胞胞體縮小、胞核固縮深染，損傷嚴(yán)重，排列紊亂核膜不清，核仁消失。而HIR組海馬存活的錐體細(xì)胞數(shù)較之常溫組12h、1d

4、、3d時(shí)間點(diǎn)均明顯增加。 2.TUNEL標(biāo)記 IR組于缺血再灌注后6h在海馬CA1區(qū)陽性細(xì)胞開始增多，缺血再灌注1d時(shí)陽性細(xì)胞數(shù)最多。而HIR組6h、12h、1d時(shí)間點(diǎn)陽性細(xì)胞數(shù)均較常溫組少，且凋亡高峰延遲至第3d。 3.免疫印跡結(jié)果IR組于缺血再灌注6h后P-JNK出現(xiàn)免疫反應(yīng)增強(qiáng)，隨著再灌注時(shí)間的延長，逐漸升高，于3d時(shí)達(dá)到高峰；HIR組較假手術(shù)組比，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)表達(dá)均明顯降低。全腦缺血再灌注后6hC-JUN蛋白在IR