桃紅四物湯對大鼠腦缺血再灌注損傷海馬CA1區(qū)神經元的治療作用研究.pdf

1、目的:
　　腦缺血再灌注損傷發(fā)生于多種腦血管疾病中，有著十分復雜的作用機制，目前仍沒有確切的治療方法以減輕腦缺血再灌注后所引起的神經損傷。多數(shù)最新研究成果表明細胞凋亡在腦缺血再灌注損傷中起到重要作用，其中Caspase-3、p53已被證實與神經元凋亡有著密切相關的關系。在臨床應用中桃紅四物湯對缺血性腦血管疾病的治療有顯著效果，但是桃紅四物湯對抑制腦缺血再灌注損傷海馬CA1區(qū)神經元的凋亡機制仍不十分清楚。為此，本研究通過給藥于雄性S

2、D大鼠大腦中動脈阻塞再灌注模型高、中、低劑量的桃紅四物湯，擬揭示桃紅四物湯可通過抑制大鼠海馬CA1區(qū)神經元Caspase-3、p53的表達而減少神經元凋亡，進一步證明桃紅四物湯對腦缺血再灌注損傷具有治療作用。
　　方法:
　　將100只雄性SD大鼠隨機分為正常組、模型組（大腦中動脈阻塞再灌注組）、桃紅四物湯高劑量組(2.1g/kg)、中劑量組(1.4 g/kg)、低劑量組(0.7g/kg)共5組，每組20只。采用改良后的新式

3、線栓法制備雄性SD大鼠大腦中動脈阻塞再灌注模型。缺血90分鐘再灌注24h后，參照Garcia神經功能評分標準，評價各組大鼠的神經行為學功能，滿分為18分。綜合得分在6-12分者，方為造模成功。24h后，用高、中、低劑量的桃紅四物湯分別對桃紅四物湯高、中、低劑量組進行連續(xù)7d的灌胃治療，每日兩次，早晚各一次;模型組和正常組則正常喂養(yǎng)。到第8d后，對各實驗組大鼠進行神經功能評分并處死取腦;進行TTC染色，使用Image-Pro-Plus軟件

4、測量各組大鼠腦梗死體積率;通過Nissl染色法顯示神經元形態(tài);TUNEL法顯示凋亡神經元形態(tài);免疫組織化學法測定Caspase-3、p53的表達情況;采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。
　　結果:
　　1、神經功能評分結果:大鼠神經功能評分正常組均為18分;神經功能評分模型組比正常組有明顯降低(p＜0.01）;神經功能評分桃紅四物湯高、中、低劑量組均比模型組有明顯增加，且神經功能評分隨著桃紅四物湯給藥劑量的增加而增加

5、(p＜0.01)。
　　2、TTC染色結果:大鼠海馬CA1區(qū)神經元正常組均勻紅染無梗死灶形成，對比之下，大鼠海馬CA1區(qū)神經元模型組形成大量蒼白梗死灶(p＜0.01),大鼠海馬CA1區(qū)神經元桃紅四物湯高、中、低劑量組的梗死灶范圍均比模型組有明顯減少(0＜0.01），梗死灶范圍隨著給藥劑量的增加而減少(p＜0.05)。
　　3、Nissl染色結果:與大鼠海馬CA1區(qū)神經元正常組相比，大鼠海馬CA1區(qū)神經元模型組的海馬CA1區(qū)正

6、常神經元數(shù)量有明顯減少(p＜0.01）;大鼠海馬CA1區(qū)神經元桃紅四物湯高、中、低劑量組的大鼠海馬CA1區(qū)神經元正常神經元數(shù)量與模型組相比有明顯增加(p＜0.01），并隨著給藥劑量增加而增加(p＜0.05)。
　　4、TUNEL染色法結果:與大鼠海馬CA1區(qū)神經元正常組相比，大鼠海馬CA1區(qū)神經元模型組缺血再灌注區(qū)海馬CA1區(qū)神經元凋亡數(shù)量有明顯增加(p＜0.01);大鼠海馬CA1區(qū)神經元桃紅四物湯高、中、低劑量組大鼠的海馬CA1

7、區(qū)神經元凋亡數(shù)量與模型組相比有著明顯減少（p＜0.01，并隨著給藥劑量的增加而減少(p＜0.01)。
　　5、免疫組織化學染色法結果:與大鼠海馬CA1區(qū)神經元正常組相比，大鼠海馬CA1區(qū)神經元模型組的大鼠海馬CA1區(qū)神經元的Caspase-3、p53的陽性表達有顯著增加(p＜0.01;大鼠海馬CA1區(qū)神經元桃紅四物湯高、中、低劑量組大鼠的大鼠海馬CA1區(qū)神經元的Caspase-3、p53的陽性表達較模型組有明顯減弱(p＜0.01)