圍產(chǎn)期奶牛肝微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因表達(dá)的調(diào)控研究.pdf

1、本研究通過奶牛飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、體外新生牛肝細(xì)胞培養(yǎng)和定量RT-PCR方法，運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)，檢測(cè)不同能量水平(80％、100％和120％能量組)對(duì)圍產(chǎn)期奶牛肝MTPmRNA的豐度，觀測(cè)體外牛肝細(xì)胞培養(yǎng)液中添加不同濃度的神經(jīng)內(nèi)分泌因子(瘦蛋白、胰島素和胰高血糖素)和代謝產(chǎn)物(葡萄糖、非酯化脂肪酸和β-羥丁酸)對(duì)肝細(xì)胞MTPmRNA表達(dá)的影響等工作，從細(xì)胞和分子水平研究能量代謝狀態(tài)、神經(jīng)內(nèi)分泌因子和代謝產(chǎn)物對(duì)圍產(chǎn)期奶牛肝VLDL組裝與分泌的調(diào)節(jié)

2、蛋白MTP基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同能量組奶牛肝MTPmRNA豐度均呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，產(chǎn)后均高于產(chǎn)前，且產(chǎn)后1d到28d差異顯著(P＜0.01或P＜0.05)，而后回降，至56d趨于平穩(wěn)(P＞0.05)；100％能量組肝MTPmRNA豐度在產(chǎn)后1d達(dá)到峰值，而80％能量組和120％能量組在產(chǎn)后14d才達(dá)到最大峰值(P＜0.01)；120％能量組產(chǎn)后1～28d顯著高于80％能量組，產(chǎn)后14d顯著高于100％

3、能量組(P＜0.01)；100％能量組產(chǎn)后1d和28d顯著高于80％能量組(P＜0.01或P＜0.05)。產(chǎn)前和產(chǎn)后56d，各試驗(yàn)組奶牛肝MTPmRNA的豐度無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。表明不同能量攝入水平可影響奶牛肝MTPmRNA的表達(dá)。各試驗(yàn)組奶牛顯著上調(diào)分娩前后和泌乳初期的肝MTPmRNA豐度，且80％能量組奶牛分娩后肝MTPmRNA豐度低于120％能量組和100％能量組，說明干乳期120％和100％能量組可能由于產(chǎn)后肝TG含量

4、增加，促進(jìn)了奶牛肝MTPmRNA的表達(dá)。干乳期給予高能量飼料可上調(diào)圍產(chǎn)期奶牛肝MTPmRNA豐度，并有可能促進(jìn)圍產(chǎn)期奶牛肝VLDL的組裝和分泌，進(jìn)而調(diào)節(jié)肝脂轉(zhuǎn)運(yùn)。 體外肝細(xì)胞培養(yǎng)添加神經(jīng)內(nèi)分泌因子結(jié)果顯示，低胰島素濃度顯著地抑制了肝細(xì)胞MTPmRNA表達(dá)水平，但高濃度(100nmol/L以上)可上調(diào)MTPmRNA豐度；胰高血糖素顯著地抑制了肝細(xì)胞MTPmRNA表達(dá)水平，該抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性的增強(qiáng)；瘦蛋白先促進(jìn)MTPmRNA表

5、達(dá)再抑制MTPmRNA表達(dá)水平，表現(xiàn)出雙重作用。表明胰島素、胰高血糖素、瘦蛋白可能是影響MTP基因表達(dá)的內(nèi)分泌因子。 體外肝細(xì)胞培養(yǎng)添加代謝產(chǎn)物結(jié)果顯示，非酯化脂肪酸促進(jìn)肝細(xì)胞的MTPmRNA表達(dá)水平，且低濃度(0.5mmol/L)的非酯化脂肪酸表現(xiàn)出強(qiáng)的豐度上調(diào)；β-羥丁酸對(duì)MTPmRNA表達(dá)表現(xiàn)出先促進(jìn)再抑制的雙重作用；葡萄糖顯著地促進(jìn)了肝細(xì)胞MTPmRNA表達(dá)水平，且在低濃度(0.5mmol/L)下就呈現(xiàn)強(qiáng)的促進(jìn)作用。表明