神經(jīng)嵴干細胞定向分化黑色素細胞前體的機理研究.pdf

1、目的:本課題旨在研究神經(jīng)嵴干細胞來源的黑色素細胞前體發(fā)育的分子機制,探討哪些因子在其發(fā)育過程中發(fā)揮作用。
　　 方法:利用免疫熒光檢測的方法,找出神經(jīng)嵴來源的黑色素細胞前體出現(xiàn)的時間；采用原代小鼠胚胎神經(jīng)管外植法技術對小鼠胚胎神經(jīng)管進行體外培養(yǎng),通過移除神經(jīng)管和替換神經(jīng)管兩種辦法以檢測神經(jīng)管對黑色素細胞前體發(fā)育的影響；通過基因芯片的方法找出Mitf基因敲除型小鼠神經(jīng)管所分泌的多種生長因子；并參考文獻資料后,通過體外培養(yǎng)小鼠胚胎神

2、經(jīng)管24h后移除神經(jīng)管,加入生長因子誘導分化黑色素細胞前體的辦法以檢測基因芯片中幾種可能的生長因子在誘導神經(jīng)嵴干細胞定向分化成黑色素細胞前體過程中的作用,通過免疫熒光的方法對黑色素細胞前體進行標記,并計數(shù)比較,進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果:B6野生型小鼠10.5天胚胎神經(jīng)管背側開始有黑色素細胞前體出現(xiàn)；保留神經(jīng)管的神經(jīng)嵴干細胞中有較多黑色素細胞前體出現(xiàn),而移除神經(jīng)管后的神經(jīng)嵴干細胞中檢測不到MITF蛋白表達的細胞；當Mitf基因

3、敲除型小鼠神經(jīng)管存在于B6野生型小鼠神經(jīng)嵴干細胞中,神經(jīng)嵴干細胞能夠分化成黑色素細胞前體；Kit1,EDN3,Wnt3a對于表達MITF蛋白的黑色素細胞前體的產(chǎn)生是必需的。
　　 結論:神經(jīng)嵴來源的黑色素細胞前體在小鼠10.5天胚胎神經(jīng)管背側開始出現(xiàn)；神經(jīng)管在神經(jīng)嵴干細胞分化成黑色素細胞前體的發(fā)育過程中起著極其重要的作用,為神經(jīng)嵴干細胞定向分化成黑色素細胞前體所必需；Kit1,EDN3,Wnt3a三種生長因子在神經(jīng)嵴來源的黑色素