免疫抑制藥物對小鼠樹突狀細(xì)胞分化成熟的影響.pdf

1、目的：建立小鼠體外樹突狀細(xì)胞(DC)培養(yǎng)、擴(kuò)增和獲取高純度不同成熟狀態(tài)樹突狀細(xì)胞的操作流程(OP)；同時觀察體外培養(yǎng)條件下，不同免疫抑制藥物單獨及聯(lián)合作用下對樹突狀細(xì)胞成熟狀態(tài)的影響。 方法：利用小鼠的骨髓細(xì)胞體外培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞，將培養(yǎng)的樹突狀細(xì)胞分成六組：A組為對照組，培養(yǎng)過程中除添加細(xì)胞因子：重組小鼠粒細(xì)胞．巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rrGM-CSF)、重組小鼠白細(xì)胞介素4(nIL-4)、重組小鼠腫瘤壞死因子a(rrTNF-α)

2、、重組小鼠Y干擾素(rrIFN-γ)外不添加任何藥物；B、C、D、E、F組為實驗組，除上述細(xì)胞因子外，在培養(yǎng)至第6天的樹突狀細(xì)胞中加入不同濃度的地塞米松(DEX)、環(huán)磷酰胺(CTX)、甲基強(qiáng)的松龍(MP)共同培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)變化，EIJSA法檢測各組培養(yǎng)上清中白細(xì)胞介素12(IL-12)的水平；同時用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞共刺激分子CD80、CD86的表達(dá)水平。 結(jié)果： ①樹突狀細(xì)胞培養(yǎng)的情況：在倒置顯微鏡下觀察骨髓前體細(xì)

3、胞在培養(yǎng)板中的生長情況良好，細(xì)胞大量增殖； ②不同時期樹突狀細(xì)胞呈現(xiàn)不同的形態(tài)特征，到第6天收獲未成熟樹突狀細(xì)胞，此時加入rrTNF-α、rrIFN-γ，第9天收獲成熟樹突狀細(xì)胞。每2只小鼠的骨髓細(xì)胞可得到2-5×107個樹突狀細(xì)胞，完全能夠滿足實驗的要求； ③未加免疫抑制藥物組培養(yǎng)液上清中白細(xì)胞介素12的水平隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加而升高，成熟組樹突狀細(xì)胞培養(yǎng)上清中白細(xì)胞介素12的水平高于未成熟組(P<0.05)；

4、④在加入免疫抑制藥物刺激后，成熟組樹突狀細(xì)胞培養(yǎng)上清中白細(xì)胞介素12的水平均低于對照組(P<0.05)； ⑤未加免疫抑制藥物組樹突狀細(xì)胞表面共刺激分子CD80及CD86表達(dá)水平隨著培養(yǎng)天數(shù)的增加而升高，成熟組樹突狀細(xì)胞表面共刺激分子CDS0及CD86表達(dá)水平均高于未成熟組(P<0.05)； ⑥用免疫抑制藥物處理過的DC，其表面共刺激分子CD80、CD86的表達(dá)水平較對照組有不同程度降低(P<0.05)，高濃度組CD80、

5、CD86的表達(dá)水平較低濃度組下降明顯(P<0.05)； ⑦單獨的DEX、CTX、和MP處理組的DC表面共刺激分子CD80、CD86的表達(dá)水平降低和CTX+DEX組、CTX+MP組的DC的表達(dá)水平下降相近，兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論：本實驗成功地在體外培養(yǎng)擴(kuò)增昆明鼠未成熟和成熟狀態(tài)的樹突狀細(xì)胞；不同免疫抑制藥物處理的DC分泌的白介素12的水平更低，提示可能可誘導(dǎo)反應(yīng)向Th2型偏倚，使機(jī)體重新達(dá)到Th1