青藤堿對大鼠骨髓來源樹突狀細(xì)胞分化成熟的影響及鑒定.pdf

1、【目的】探討青藤堿對大鼠來源骨髓樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell，DC)體外分化及成熟的影響，并從形態(tài)、表型、分泌功能及刺激T細(xì)胞活化能力等方面進行鑒定。
　　【方法】從大鼠股骨、脛骨取骨髓來源DC的前體細(xì)胞，分離并經(jīng)GM-CSF及IL作用誘導(dǎo)出imDC，第7天加入LPS刺激成熟，刺激imDC成熟時，分為對照組和低、中、高不同劑量的青藤堿處理組，作用48小時后收獲DC，以下方面檢測各組細(xì)胞的成熟程度：1.倒置相差顯微鏡觀察

2、細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征情況；2.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型CD80、RT1B的表達(dá)情況；3. EIISA檢測細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-12情況；4.混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測DC刺激同種異體T淋巴細(xì)胞活化的能力。
　　【結(jié)果】加用LPS+不同濃度青藤堿刺激48小時后，檢測結(jié)果：
　　1.倒置顯微鏡下觀察，LPS組可見細(xì)胞符合成熟樹突狀細(xì)胞形態(tài)特性；SN L組可見絕大部分樹突狀細(xì)胞成熟；SN M組細(xì)胞部分懸浮，成熟度差；SN H組大部分尚未成熟。<

3、br>　　2.流式細(xì)胞儀檢測CD80在LPS組、SN L組、SN M組、SN H組的表達(dá)分別是93.54％、79.29%、61.40%、35.20%；與對照組相比，青藤堿低、中、高劑量組的表達(dá)顯著降低(p<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；檢測RT1B在LPS組、SN L組、SN M組、SN H組的表達(dá)率分別是97.70%、91.20%、84.40%、65.90%與對照組相比，青藤堿中、高劑量組的表達(dá)顯著降低(p<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意

4、義，而低劑量組無統(tǒng)計學(xué)差異(p﹥0.05)。
　　3. ELISA檢測細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-12p70結(jié)果，對照組與低、中、高劑量組分別是2320.26±60.21，2123.35±64.14，850.01±71.21，230.19±28.87。經(jīng)統(tǒng)計分析，與對照組相比，青藤堿中、高劑量處理后的DC培養(yǎng)上清中IL-12p70的含量有所降低(p<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，青藤堿低劑量處理組培養(yǎng)上清中IL-12p70的含量無顯著性

5、差異(p﹥0.05)。
　　4.混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測DC刺激同種異體T淋巴細(xì)胞活化的能力結(jié)果：1：5混合時對照組和低、中、高劑量組OD值分別是4.53±0.63、4.48±0.50、3.91±0.48、2.85±0.51；1：10混合時對照組和低、中、高劑量組OD值分別是3.86±0.49、3.80±0.41、3.29±0.38、2.61±0.51；1：20混合時對照組和低、中、高劑量組OD值分別是3.08±0.31、2.99±0

6、.40、2.16±0.42、1.65±0.38；1：40混合時對照組和低、中、高劑量組OD值分別是1.99±0.30、1.93±0.28、1.58±0.34、1.15±0.36。經(jīng)統(tǒng)計分析，與對照組相比，在不同的混合比例下，青藤堿中、高劑量組OD值均有顯著降低((p<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而低劑量組OD值的改變無顯著性差異(p﹥0.05)。
　　【結(jié)論】多種細(xì)胞因子可體外誘導(dǎo)大鼠骨髓樹突狀細(xì)胞并促進其成熟，而青藤堿能抑制D