木糖醇對(duì)大鼠腎小球系膜細(xì)胞損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的： 1．觀察不同劑量木糖醇（Xy）對(duì)鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的糖尿病（DM）大鼠腎小球超微結(jié)構(gòu)的影響，并探討可能的機(jī)制。 2．觀察不同濃度Xy、葡萄糖、尿酸培養(yǎng)條件下大鼠腎小球系膜細(xì)胞（MCs）的增殖情況及Ⅳ型膠原（Col-Ⅳ）和基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）的表達(dá)水平，觀察Xy對(duì)腎臟細(xì)胞是否有直接損害作用以進(jìn)一步評(píng)價(jià)Xy作為DM患者食品甜味添加劑的利弊。 方法： 1．體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：將100只雄性Wis

2、tar大鼠分為五組：隨機(jī)選取16只為正常對(duì)照組（NC組），余84只予STZ50mg/kg尾靜脈一次性注射，72 h后測(cè)血糖≥16．7mmol/L為造模成功，取80只成模大鼠按照喂養(yǎng)飼料不同平均分為糖尿病對(duì)照組（DC組）、5％Xy組（D+5％Xy組）、10％Xy組（D+10％Xy組）和20％Xy組（D+20％Xy組）。于8 w末處死動(dòng)物，摘取左側(cè)腎臟，應(yīng)用透射電子顯微鏡觀察腎小球超微結(jié)構(gòu)的改變。 2．體外實(shí)驗(yàn)：采用噻唑藍(lán)（MTT）

3、法分別檢測(cè)24h、48h和72h時(shí)不同濃度Xy（1、5、10、20mmol/L）、尿酸（0．1、0．2、0．4、0．8mmol/L）、葡萄糖（15、25mmol/L）培養(yǎng)條件下大鼠MCs的增殖情況，通過(guò)測(cè)定光密度（OD）值評(píng)價(jià)各干預(yù)因素對(duì)細(xì)胞有無(wú)損害作用及其作用強(qiáng)度；應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法測(cè)定48h時(shí)各組細(xì)胞Col-Ⅳ和MMP-2的表達(dá)。 結(jié)果： 1．體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：①各組大鼠體重和血糖的變化：8 w時(shí)DM各組與NC組比較，體重均

4、減輕（P<0．05），血糖升高（P<0．05）；喂食Xy的各組與DC組比較，體重均有所增加，血糖均有所下降，其中D+20％Xy組體重增加、血糖下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。②腎重指數(shù)的變化：DM各組較NC組升高（P<0．05）；D+20％Xy組較DC組下降（P<0．05）。③腎小球超微結(jié)構(gòu)的變化：透射電鏡下可見(jiàn)NC組腎小球形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，系膜區(qū)無(wú)擴(kuò)張；DC組基底膜厚薄不均，局部呈均質(zhì)樣增厚，足細(xì)胞腫脹，部分足突扁平融合，系膜細(xì)胞和系膜

5、基質(zhì)增生；與DC組相比，D+20％Xy組無(wú)明顯變化，而D+10％Xy組腎小球損傷更嚴(yán)重：基底膜均質(zhì)樣增厚，系膜細(xì)胞和基質(zhì)明顯增生，系膜區(qū)擴(kuò)張顯著。 2．體外實(shí)驗(yàn)：①不同濃度Xy對(duì)MCs增殖的影響：各Xy組OD值與同期NC組相比差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各Xy組間差別亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05）；②不同濃度尿酸對(duì)MCs增殖的影響：同期內(nèi)各尿酸干預(yù)組OD值均大于NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）；③不同濃度葡萄糖對(duì)MCs增殖的影響：

6、兩高糖組OD值均大于同期NC組（P<0．05）；隨葡萄糖濃度升高，OD值有增加趨勢(shì)，但兩高糖組間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05）；④不同濃度Xy對(duì)MCs分泌Col-Ⅳ和MMP-2的影響：各濃度Xy培養(yǎng)條件下，MCs表達(dá)Col-Ⅳ和MMP-2的水平與NC組相比并無(wú)變化（P>0．05）；⑤不同濃度尿酸對(duì)MCs分泌Col-Ⅳ和MMP-2的影響：各濃度尿酸組與NC組相比，Col-Ⅳ呈高表達(dá)，MMP-2呈低表達(dá)，且0．4 mmol/L和0．8 m

7、mol/L尿酸組與NC組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）；⑥不同濃度葡萄糖對(duì)MCs分泌Col-Ⅳ和MMP-2的影響：各高糖組與NC組相比Col-Ⅳ呈高表達(dá)，MMP-2呈低表達(dá)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。 結(jié)論： 1．Xy對(duì)STZ誘導(dǎo)的DM大鼠具有降低血糖、增加體重的作用；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明Xy可升高血清尿酸水平，后者可加重糖尿病大鼠的腎小球超微結(jié)構(gòu)改變。 2．木糖醇對(duì)體外培養(yǎng)的MCs并無(wú)直接損傷作用，而尿酸和高