4種植物抗菌活性及活性物質(zhì)研究.pdf

1、本文以采自廣西桂林的穿破石Cudrania tricuspidata (Carr.) Bur.ex Lavallee、白蓮蒿Artemisia sacrorum Ledeb、烏蕨Stenoloma chusanum (L.) Ching和垂穗石松Palhinhaea cernua (L.) Vasc.et Franco為研究對(duì)象，用有機(jī)溶劑冷浸提取法提取植物成分，采用帶毒平板法和生長(zhǎng)速率法測(cè)定了甲醇提取物的抗菌活性。通過有機(jī)溶劑萃取、硅

2、膠柱層析、薄層層析等技術(shù)，采用活性跟蹤法對(duì)其抗菌活性成分進(jìn)行分離純化，并用質(zhì)譜、核磁共振譜鑒定抗菌活性成分的結(jié)構(gòu)。初步探究了4種植物提取物的抗菌機(jī)理。
　　采用帶毒平板法測(cè)定了穿破石、白蓮蒿、烏蕨和垂穗石松甲醇提取物對(duì)傷寒沙門氏菌、痢疾志賀氏菌、普通變形桿菌、溶壁微球菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、藤黃微球菌、金黃色葡萄球菌、巨大芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、炭疽桿菌、乙型副傷寒桿菌、白色念珠菌的抑制活性。結(jié)果表明

3、:處理濃度為10mg/mL時(shí)，穿破石、白蓮蒿、烏蕨、垂穗石松4種植物提取物對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌(G+)的抑制效果較革蘭氏陰性菌(G-)好，7種革蘭氏陽(yáng)性菌中，只有炭疽桿菌不能被完全抑制生長(zhǎng)，7種革蘭氏陰性菌中，只有傷寒沙門氏菌、痢疾志賀氏菌、普通變形桿菌被完全抑制生長(zhǎng);銅綠假單胞菌只有烏蕨提取物能完全抑制。白色念珠菌只有白蓮蒿提取物在24h時(shí)能完全抑制其生長(zhǎng)，48h有菌落生長(zhǎng)。
　　進(jìn)一步測(cè)定了4種植物提取物對(duì)部分病原菌的最低抑制濃度(

4、MIC)，發(fā)現(xiàn)穿破石、白蓮蒿的抗菌效果較好，烏蕨和垂穗石松較差，其中穿破石對(duì)除炭疽桿菌外的6種供試革蘭氏陽(yáng)性菌的MIC均小于或等于0.5mg/mL。
　　采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了4種植物甲醇提取物對(duì)9種植物病原真菌菌絲生長(zhǎng)的抑制活性。提取物濃度為10mg/mL時(shí)，穿破石和白蓮蒿提取物對(duì)9種供試菌的菌絲生長(zhǎng)均有抑制作用，兩者對(duì)除水稻胡麻葉病菌和玉米小斑病菌外的7種供試菌的菌絲生長(zhǎng)抑制率均在60％以上。烏蕨提取物對(duì)煙草黑脛病菌抑制率達(dá)

5、70.15％，對(duì)其余供試菌的抑制率均低于50％。垂穗石松提取物僅對(duì)甘藍(lán)黑斑病菌、甘蔗鳳梨病菌、煙草黑脛病菌的抑制率高于50％。
　　進(jìn)一步測(cè)定對(duì)病原真菌抑制率大于50％的植物提取物對(duì)相應(yīng)供試病原真菌菌絲的毒力。結(jié)果表明，EC50值范圍為0.4559～9.9518mg/mL，其中穿破石對(duì)玉米大斑病菌的毒力最高。
　　采用液-液萃取法將4種植物甲醇提取物初步分離為石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物及水萃取物，并測(cè)定各部分

6、抑制動(dòng)物病原菌的活性，發(fā)現(xiàn)穿破石、白蓮蒿、烏蕨提取物的活性成分主要集中在乙酸乙酯萃取物中，而垂穗石松提取物經(jīng)萃取分離后，抑菌活性明顯下降。
　　以金黃色葡萄球菌、傷寒沙門氏菌為供試菌，采用色譜分離技術(shù)，結(jié)合活性跟蹤，分別對(duì)4種植物提取物的活性成分進(jìn)行分離，從穿破石乙酸乙酯萃取物中分離得到3個(gè)活性化合物，其中兩個(gè)化合物鑒定為環(huán)桂木黃素、香橙素。
　　采用濾紙片擴(kuò)散法測(cè)定了3個(gè)化合物對(duì)9種動(dòng)物病原細(xì)菌的抑制活性，結(jié)果表明，濃度為

7、5mg/mL時(shí)，CPS-1對(duì)除普通變形桿菌外的8種供試動(dòng)物病原菌均具有抑制活性，抑菌圈直徑在9.13～9.89mm之間。環(huán)桂木黃素對(duì)傷寒沙門氏菌、痢疾志賀氏菌、溶壁微球菌、枯草芽孢桿菌、藤黃微球菌、金黃色葡萄球菌均具有抑制活性，抑菌圈直徑在6.11～6.23mm之間。香橙素僅對(duì)痢疾志賀氏菌、溶壁微球菌、巨大芽孢桿菌有抑制活性，抑菌圈直徑分別為6.12、6.13、6.12mm。用帶毒平板法測(cè)定3種化合物對(duì)金黃色葡萄球菌、傷寒沙門氏菌的MI

8、C，可知:CPS-1、環(huán)桂木黃素、香橙素對(duì)金黃色葡萄球菌的MIC分別為0.025、0.2、0.6mg/mL，對(duì)傷寒沙門氏菌的MIC分別為1.4、2、2mg/mL。
　　采用OD值法分別測(cè)定穿破石、白蓮蒿、烏蕨甲醇提取物作用下的金黃色葡萄球菌、傷寒沙門氏菌及穿破石、白蓮蒿甲醇提取物作用下的白色念珠菌的生長(zhǎng)曲線，發(fā)現(xiàn)穿破石、白蓮蒿、烏蕨甲醇提取物均能主要抑制金黃色葡萄球菌、傷寒沙門氏菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的繁殖，并使病原菌提前進(jìn)入衰亡期。穿破石