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1、本文以茅蒼術(shù)Atractylodes lancea(Thunb.)DC.為研究對(duì)象,用有機(jī)溶劑冷浸提取法提取植物成分。以玉米大斑病菌Exserohilum turcicum(Pass) Leonard et Suggs、玉米小斑病菌Bipolaris maydis(Nisikado et Miyake) Shoeml、金桔砂皮病菌Diaporthe citri(Fawcett) Wolf、甘藍(lán)黑斑病菌Alternaria olerace
2、a M.Ibrath、甘蔗鳳梨病菌Ceratocystis paradoxa(Dode)Moreau、茶輪斑病菌Pestalotiopsis theae(Sawada) Steyaert、水稻胡麻葉斑病菌Cochliobolusmiyabeanus(Ito et Kubibay) Drechsler et Dastur、辣椒炭疽病菌Colletotrichum capsici(syd.)Butl、貢柑鏈格孢菌Alternaria cit
3、ri、煙草黑脛病菌Phytophthora parasitica var Nicotianae(Breda de Hean)Tucker10種植物病原真菌為供試菌,采用菌絲生長(zhǎng)速率法和孢子萌發(fā)法測(cè)定了茅蒼術(shù)甲醇提取物的抑菌活性。通過(guò)有機(jī)溶劑萃取、硅膠柱層析、薄層層析等分離技術(shù),并結(jié)合活性跟蹤法對(duì)茅蒼術(shù)抑菌活性成分進(jìn)行分離純化。利用核磁共振譜、質(zhì)譜分析技術(shù)鑒定抑菌活性成分的結(jié)構(gòu)。初步探究了活性物質(zhì)的抑菌作用機(jī)理。
采用菌絲生長(zhǎng)速
4、率法測(cè)定了茅蒼術(shù)甲醇提取物對(duì)10種植物病原真菌菌絲生長(zhǎng)的抑制活性。結(jié)果表明,質(zhì)量濃度為10g/L時(shí),茅蒼術(shù)甲醇提取物對(duì)其中9種供試菌的抑制率均在70%以上,其中對(duì)玉米大斑病菌、金桔砂皮病菌和煙草黑脛病菌表現(xiàn)出很高的抑制活性,抑制率分別為91.01%、100%、100%。對(duì)玉米小斑病菌的抑制活性很低,抑制率僅為8.23%。
進(jìn)一步測(cè)定了茅蒼術(shù)甲醇提取物對(duì)9種植物病原真菌的毒力。發(fā)現(xiàn)茅蒼術(shù)甲醇提取物對(duì)9種植物病原真菌的毒力較高,E
5、C50值為0.1316~2.7264g/L之間,對(duì)各種植物病原真菌菌絲的毒力相差較大,最大毒力(玉米大斑病菌)是最小毒力(貢柑鏈格孢菌)的20.72倍,對(duì)貢柑鏈格孢菌菌絲的毒力最低,EC50為2.7264 g/L,對(duì)玉米大斑病菌菌絲的毒力最高, EC50值0.1316g/L。
采用孢子萌發(fā)法測(cè)定了茅蒼術(shù)甲醇提取物對(duì)10種植物病原真菌孢子萌發(fā)的抑制作用。結(jié)果表明,質(zhì)量濃度為10g/L時(shí),茅蒼術(shù)甲醇提取物除了對(duì)玉米小斑病菌孢子萌發(fā)
6、的抑制率只有7.92%外,對(duì)9種供試菌的抑制率均在70%以上,其中,對(duì)玉米大斑病菌、金桔砂皮病菌、甘蔗鳳梨病菌、茶輪斑病菌、煙草黑脛病菌孢子的萌發(fā)有強(qiáng)烈的抑制作用,抑制率分別為95.24%、100%、95.36%、90.11%、100%。
利用液-液萃取法將茅蒼術(shù)甲醇提取物初步分成石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物。經(jīng)活性測(cè)定,發(fā)現(xiàn)抑菌活性成分主要存在于乙酸乙酯和石油醚萃取物中。乙酸乙酯萃取物經(jīng)硅膠柱層析和薄
7、層層析分離純化,并結(jié)合活性跟蹤法,從中分離得到1個(gè)活性化合物。經(jīng)核磁共振(NMR)和質(zhì)譜(MS)解析,該活性化合物被鑒定為蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙。
采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)10種植物病原真菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果表明,質(zhì)量濃度為0.1g/L時(shí),蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)金桔砂皮病菌、甘藍(lán)黑斑病菌、煙草黑脛病菌的抑制活性較高,抑制率分別為78.20%、70.75%、80.83%;對(duì)玉米小斑病菌、水稻胡麻葉斑病菌的抑菌活性較低,抑制率分
8、別為33.41%、29.78%。
進(jìn)一步測(cè)定了蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)8種植物病原真菌的毒力。發(fā)現(xiàn)蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)金桔砂皮病菌、甘蔗鳳梨病菌的EC50分別為0.0609 g/L、0.0551 g/L,與多菌靈毒力比較,蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)金桔砂皮病菌、甘蔗鳳梨病菌的抑菌活性低于多菌靈。但蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)玉米大斑病菌、甘藍(lán)黑斑病菌、茶輪斑病菌、辣椒炭疽病菌、貢柑鏈格孢菌、煙草黑脛病菌的EC50分別為0.0302 g/L、0.0410 g/L、0.0
9、727 g/L、0.0845 g/L、0.0612 g/L、0.0434 g/L,抑菌活性明顯高于多菌靈。
初步探究了蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)煙草黑脛病菌的抑菌作用機(jī)理。結(jié)果表明,經(jīng)蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙處理后的煙草黑脛病菌,其部分菌絲體膨大、畸形、分支多、斷裂;菌絲體細(xì)胞膜的通透性發(fā)生改變,造成菌絲體內(nèi)含物外滲,菌絲體培養(yǎng)液的電導(dǎo)率增加;菌絲體的可溶性蛋白含量降低;果膠酶活性降低;超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化物酶(POD)、過(guò)氧化氫酶(CA
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