中藥植物茅蒼術(shù)抗菌活性及活性物質(zhì)研究.pdf

1、本文以茅蒼術(shù)Atractylodes lancea(Thunb.)DC.為研究對(duì)象，用有機(jī)溶劑冷浸提取法提取植物成分。以玉米大斑病菌Exserohilum turcicum(Pass) Leonard et Suggs、玉米小斑病菌Bipolaris maydis(Nisikado et Miyake) Shoeml、金桔砂皮病菌Diaporthe citri(Fawcett) Wolf、甘藍(lán)黑斑病菌Alternaria olerace

2、a M.Ibrath、甘蔗鳳梨病菌Ceratocystis paradoxa(Dode)Moreau、茶輪斑病菌Pestalotiopsis theae(Sawada) Steyaert、水稻胡麻葉斑病菌Cochliobolusmiyabeanus(Ito et Kubibay) Drechsler et Dastur、辣椒炭疽病菌Colletotrichum capsici(syd.)Butl、貢柑鏈格孢菌Alternaria cit

3、ri、煙草黑脛病菌Phytophthora parasitica var Nicotianae(Breda de Hean)Tucker10種植物病原真菌為供試菌，采用菌絲生長(zhǎng)速率法和孢子萌發(fā)法測(cè)定了茅蒼術(shù)甲醇提取物的抑菌活性。通過(guò)有機(jī)溶劑萃取、硅膠柱層析、薄層層析等分離技術(shù)，并結(jié)合活性跟蹤法對(duì)茅蒼術(shù)抑菌活性成分進(jìn)行分離純化。利用核磁共振譜、質(zhì)譜分析技術(shù)鑒定抑菌活性成分的結(jié)構(gòu)。初步探究了活性物質(zhì)的抑菌作用機(jī)理。
　　采用菌絲生長(zhǎng)速

4、率法測(cè)定了茅蒼術(shù)甲醇提取物對(duì)10種植物病原真菌菌絲生長(zhǎng)的抑制活性。結(jié)果表明，質(zhì)量濃度為10g/L時(shí)，茅蒼術(shù)甲醇提取物對(duì)其中9種供試菌的抑制率均在70％以上，其中對(duì)玉米大斑病菌、金桔砂皮病菌和煙草黑脛病菌表現(xiàn)出很高的抑制活性，抑制率分別為91.01％、100％、100％。對(duì)玉米小斑病菌的抑制活性很低，抑制率僅為8.23％。
　　進(jìn)一步測(cè)定了茅蒼術(shù)甲醇提取物對(duì)9種植物病原真菌的毒力。發(fā)現(xiàn)茅蒼術(shù)甲醇提取物對(duì)9種植物病原真菌的毒力較高，E

5、C50值為0.1316～2.7264g/L之間，對(duì)各種植物病原真菌菌絲的毒力相差較大，最大毒力（玉米大斑病菌）是最小毒力（貢柑鏈格孢菌）的20.72倍，對(duì)貢柑鏈格孢菌菌絲的毒力最低，EC50為2.7264 g/L，對(duì)玉米大斑病菌菌絲的毒力最高， EC50值0.1316g/L。
　　采用孢子萌發(fā)法測(cè)定了茅蒼術(shù)甲醇提取物對(duì)10種植物病原真菌孢子萌發(fā)的抑制作用。結(jié)果表明，質(zhì)量濃度為10g/L時(shí)，茅蒼術(shù)甲醇提取物除了對(duì)玉米小斑病菌孢子萌發(fā)

6、的抑制率只有7.92％外，對(duì)9種供試菌的抑制率均在70％以上，其中，對(duì)玉米大斑病菌、金桔砂皮病菌、甘蔗鳳梨病菌、茶輪斑病菌、煙草黑脛病菌孢子的萌發(fā)有強(qiáng)烈的抑制作用，抑制率分別為95.24％、100％、95.36％、90.11％、100％。
　　利用液-液萃取法將茅蒼術(shù)甲醇提取物初步分成石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水萃取物。經(jīng)活性測(cè)定，發(fā)現(xiàn)抑菌活性成分主要存在于乙酸乙酯和石油醚萃取物中。乙酸乙酯萃取物經(jīng)硅膠柱層析和薄

7、層層析分離純化，并結(jié)合活性跟蹤法，從中分離得到1個(gè)活性化合物。經(jīng)核磁共振(NMR)和質(zhì)譜(MS)解析，該活性化合物被鑒定為蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙。
　　采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)10種植物病原真菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果表明，質(zhì)量濃度為0.1g/L時(shí)，蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)金桔砂皮病菌、甘藍(lán)黑斑病菌、煙草黑脛病菌的抑制活性較高，抑制率分別為78.20％、70.75％、80.83％;對(duì)玉米小斑病菌、水稻胡麻葉斑病菌的抑菌活性較低，抑制率分

8、別為33.41％、29.78％。
　　進(jìn)一步測(cè)定了蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)8種植物病原真菌的毒力。發(fā)現(xiàn)蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)金桔砂皮病菌、甘蔗鳳梨病菌的EC50分別為0.0609 g/L、0.0551 g/L，與多菌靈毒力比較，蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)金桔砂皮病菌、甘蔗鳳梨病菌的抑菌活性低于多菌靈。但蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)玉米大斑病菌、甘藍(lán)黑斑病菌、茶輪斑病菌、辣椒炭疽病菌、貢柑鏈格孢菌、煙草黑脛病菌的EC50分別為0.0302 g/L、0.0410 g/L、0.0

9、727 g/L、0.0845 g/L、0.0612 g/L、0.0434 g/L，抑菌活性明顯高于多菌靈。
　　初步探究了蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)煙草黑脛病菌的抑菌作用機(jī)理。結(jié)果表明，經(jīng)蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙處理后的煙草黑脛病菌，其部分菌絲體膨大、畸形、分支多、斷裂;菌絲體細(xì)胞膜的通透性發(fā)生改變，造成菌絲體內(nèi)含物外滲，菌絲體培養(yǎng)液的電導(dǎo)率增加;菌絲體的可溶性蛋白含量降低;果膠酶活性降低;超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化物酶(POD)、過(guò)氧化氫酶(CA