PH Ⅱ-7作用模式和機(jī)理研究.pdf

1、多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)是指腫瘤細(xì)胞對(duì)一種化療藥物出現(xiàn)耐藥的同時(shí)，對(duì)其他結(jié)構(gòu)不同、作用靶位不同的化療藥物亦產(chǎn)生抗藥性，是腫瘤化療失敗和復(fù)發(fā)的根源。多藥耐藥的產(chǎn)生是多機(jī)制作用多基因參與的復(fù)雜過(guò)程，ATP結(jié)合盒(ATP Binding Cassette，ABC)家族基因過(guò)表達(dá)已被證明是MDR產(chǎn)生的重要原因，MDR1是ABC家族中最早被發(fā)現(xiàn)，影響最廣泛，最為重要的MDR相關(guān)基因，圍繞MDR1的MDR機(jī)理研究

2、及逆轉(zhuǎn)MDR研究的重要性日益凸顯。 多藥耐藥作為腫瘤化療中的常見(jiàn)現(xiàn)象，當(dāng)今仍然是化療失敗和腫瘤病人死亡的最主要原因之一。針對(duì)腫瘤MDR的產(chǎn)生過(guò)程，應(yīng)用多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑是解決腫瘤MDR的主要手段。經(jīng)過(guò)二十多年的開(kāi)發(fā)研究，已發(fā)現(xiàn)大量具有MDR逆轉(zhuǎn)活性的化合物，主要包括：鈣通道阻滯劑(維拉帕米及其衍生物)、鈣調(diào)蛋白抑制劑(噻吩嗪類(lèi)化合物)、免疫抑制劑(環(huán)孢菌素A及其衍生物)、類(lèi)固醇和激素類(lèi)似物(黃體酮、甲地孕酮)等。但這類(lèi)逆轉(zhuǎn)劑的毒副作

3、用也使其臨床應(yīng)用受到限制。 中藥當(dāng)歸龍薈丸可有效治療有效治療慢性粒細(xì)胞性白血病，我室以其有效成分靛玉紅為模板，經(jīng)定量構(gòu)效關(guān)系研究，從合成的幾十種衍生物中篩選出PHⅡ—7。本實(shí)驗(yàn)是對(duì)其活性和作用機(jī)理進(jìn)行研究。首先，在殺傷活性試驗(yàn)中，我們通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PHⅡ—7對(duì)K562細(xì)胞及其耐藥株K562/A02均有明顯的殺傷作用，且IC50相近。而K562/A02對(duì)作為陽(yáng)性對(duì)照的阿霉素的IC50值則比K562高出近百倍應(yīng)用表達(dá)譜芯片AFF

4、YMETRIX Genome u133 plus2.0輔以SYBR GREEN REALTIME PCR驗(yàn)證，研究PHⅡ—7作用前后的前述兩細(xì)胞系發(fā)現(xiàn)，經(jīng)典多藥耐藥基因MDR1表達(dá)量下調(diào)，與其磷酸化和功能密切相關(guān)的基因PKCA顯著下調(diào)。與S期細(xì)胞周期阻滯、凋亡、細(xì)胞衰老密切相關(guān)的P21，CHK1等基因顯著上調(diào)。激光共聚焦成像發(fā)現(xiàn)PHⅡ—7作用后K562/A02細(xì)胞內(nèi)ADM蓄積明顯增加，流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)這種增加呈時(shí)間依賴性。凋亡和周期實(shí)驗(yàn)證

5、明PHⅡ—7作用后細(xì)胞周期發(fā)生阻滯，細(xì)胞凋亡增加。PHⅡ—7可以抑制經(jīng)典耐藥基因MDR1的表達(dá)，并可顯著抑制PKCA的表達(dá)，通過(guò)使用SiRNA沉默PKCA的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，K562/A02細(xì)胞中PKCA的下調(diào)可導(dǎo)致c—FOS，c—JUN和MDR1基因的顯著下調(diào)，提示PHⅡ—7通過(guò)PKCA—AP1—MDR1信號(hào)通路下調(diào)MDR1基因的表達(dá)，從而逆轉(zhuǎn)耐藥腫瘤細(xì)胞的耐藥狀態(tài)。并通過(guò)作用于有關(guān)基因?qū)е录?xì)胞周期阻滯，并誘導(dǎo)凋亡。PHⅡ—7同時(shí)具備了內(nèi)在腫