苦瓜多糖和皂苷的提取純化及對乳腺癌細(xì)胞MCF-7作用機(jī)理研究.pdf

1、苦瓜具有一定的食療和藥理功效，苦瓜多糖和苦瓜皂苷類物質(zhì)更是具有一定的功能作用，他們具有一定的降血糖，增加抵抗力，抗病毒以及抗癌等功效。而乳腺癌在女性人群中最為常見，是及其難以治愈的疾病，也是導(dǎo)致死亡的原因之一。采用苦瓜多糖和皂苷對乳腺癌細(xì)胞MCF-7進(jìn)行作用，可以有效地降低乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增值，尤其是苦瓜皂苷作用更佳。
　　本論文以苦瓜多糖和皂苷為研究對象，通過大孔吸附樹脂對苦瓜多糖純化進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，研究洗脫劑濃度、上

2、樣體積和洗脫劑用量對苦瓜多糖純化效果的影響，并確定了優(yōu)化的最佳工藝參數(shù)；采用泡沫分離技術(shù)對苦瓜皂苷進(jìn)行進(jìn)一步的純化，研究不同物質(zhì)量濃度、PH和溫度對純化效果的影響，通過正交試驗(yàn)確定最佳的純化工藝條件；采用MTT法研究苦瓜多糖和苦瓜皂苷對乳腺癌細(xì)胞的增值抑制效果，并進(jìn)一步應(yīng)用HE染色、流式細(xì)胞技術(shù)和western-blot方法，對苦瓜皂苷抑制乳腺癌細(xì)胞增值機(jī)理進(jìn)行了進(jìn)一步的探討。通過以上實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論：
　?。?）通過對苦瓜多糖的

3、純化研究可知：在室溫條件下多糖上樣的質(zhì)量濃度為2.0mg/mL，多糖上樣體積為3BV，洗脫劑濃度為50％，洗脫劑體積為2BV時(shí)，純化效果最好，多糖含量從26.01%提高到66.5%。純化前后苦瓜多糖中蛋白質(zhì)含量分別為4.12%和5.60%，水分含量分別為19.2%和18.9%。純化后苦瓜蛋白含量反而增加，水分含量基本保持不變。
　?。?）通過對苦瓜皂苷的純化研究可知：在物質(zhì)量濃度為1.6mg/ml、PH為7.5和溫度為30℃時(shí)，對

4、苦瓜皂苷的純化效果最好，純度為92.8%；定性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證所提取的物質(zhì)為皂苷類物質(zhì)；經(jīng)HPLC圖譜分析，確定所提的苦瓜皂苷成分與張玉嬋等提取的皂苷成分一致。說明苦瓜皂苷提取純化技術(shù)的穩(wěn)定性。
　?。?）MCF-7增殖抑制試驗(yàn)結(jié)果表明：糖純度為26.01%，多糖作用濃度200μg/ml時(shí)，對MCF-7的抑制率達(dá)到最大值，為49.5%；多糖純度為66.5%，多糖作用濃度僅為6.25μg/ml，對MCF-7的抑制率可達(dá)到最大值，為46.5%

5、。純化后的苦瓜多糖用量比純化前的用量顯著降低。這與苦瓜多糖的純度有直接的關(guān)系；苦瓜皂苷對乳腺癌細(xì)胞的作用呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性，經(jīng)24h和48h作用后，抑制率隨劑量的增加而增大，且當(dāng)苦瓜皂苷作用濃度達(dá)到500μg/ml時(shí)，兩個(gè)不同作用時(shí)間段的抑制率相差不大，最佳抑制率為86%。
　?。?）HE試驗(yàn)結(jié)果表明，皂苷作用后的細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的胞漿濃縮、細(xì)胞質(zhì)連接不緊密，細(xì)胞變小，核破碎，并有凋亡小體出現(xiàn)；經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)可檢測到細(xì)胞周期的變化，經(jīng)