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文檔簡介
1、苦瓜具有一定的食療和藥理功效,苦瓜多糖和苦瓜皂苷類物質(zhì)更是具有一定的功能作用,他們具有一定的降血糖,增加抵抗力,抗病毒以及抗癌等功效。而乳腺癌在女性人群中最為常見,是及其難以治愈的疾病,也是導(dǎo)致死亡的原因之一。采用苦瓜多糖和皂苷對乳腺癌細(xì)胞MCF-7進(jìn)行作用,可以有效地降低乳腺癌細(xì)胞MCF-7的增值,尤其是苦瓜皂苷作用更佳。
本論文以苦瓜多糖和皂苷為研究對象,通過大孔吸附樹脂對苦瓜多糖純化進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn),研究洗脫劑濃度、上
2、樣體積和洗脫劑用量對苦瓜多糖純化效果的影響,并確定了優(yōu)化的最佳工藝參數(shù);采用泡沫分離技術(shù)對苦瓜皂苷進(jìn)行進(jìn)一步的純化,研究不同物質(zhì)量濃度、PH和溫度對純化效果的影響,通過正交試驗(yàn)確定最佳的純化工藝條件;采用MTT法研究苦瓜多糖和苦瓜皂苷對乳腺癌細(xì)胞的增值抑制效果,并進(jìn)一步應(yīng)用HE染色、流式細(xì)胞技術(shù)和western-blot方法,對苦瓜皂苷抑制乳腺癌細(xì)胞增值機(jī)理進(jìn)行了進(jìn)一步的探討。通過以上實(shí)驗(yàn)得出以下結(jié)論:
?。?)通過對苦瓜多糖的
3、純化研究可知:在室溫條件下多糖上樣的質(zhì)量濃度為2.0mg/mL,多糖上樣體積為3BV,洗脫劑濃度為50%,洗脫劑體積為2BV時(shí),純化效果最好,多糖含量從26.01%提高到66.5%。純化前后苦瓜多糖中蛋白質(zhì)含量分別為4.12%和5.60%,水分含量分別為19.2%和18.9%。純化后苦瓜蛋白含量反而增加,水分含量基本保持不變。
?。?)通過對苦瓜皂苷的純化研究可知:在物質(zhì)量濃度為1.6mg/ml、PH為7.5和溫度為30℃時(shí),對
4、苦瓜皂苷的純化效果最好,純度為92.8%;定性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證所提取的物質(zhì)為皂苷類物質(zhì);經(jīng)HPLC圖譜分析,確定所提的苦瓜皂苷成分與張玉嬋等提取的皂苷成分一致。說明苦瓜皂苷提取純化技術(shù)的穩(wěn)定性。
?。?)MCF-7增殖抑制試驗(yàn)結(jié)果表明:糖純度為26.01%,多糖作用濃度200μg/ml時(shí),對MCF-7的抑制率達(dá)到最大值,為49.5%;多糖純度為66.5%,多糖作用濃度僅為6.25μg/ml,對MCF-7的抑制率可達(dá)到最大值,為46.5%
5、。純化后的苦瓜多糖用量比純化前的用量顯著降低。這與苦瓜多糖的純度有直接的關(guān)系;苦瓜皂苷對乳腺癌細(xì)胞的作用呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性,經(jīng)24h和48h作用后,抑制率隨劑量的增加而增大,且當(dāng)苦瓜皂苷作用濃度達(dá)到500μg/ml時(shí),兩個(gè)不同作用時(shí)間段的抑制率相差不大,最佳抑制率為86%。
?。?)HE試驗(yàn)結(jié)果表明,皂苷作用后的細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的胞漿濃縮、細(xì)胞質(zhì)連接不緊密,細(xì)胞變小,核破碎,并有凋亡小體出現(xiàn);經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)可檢測到細(xì)胞周期的變化,經(jīng)
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