胃腸動(dòng)力障礙分子機(jī)制和大黃素作用機(jī)理研究.pdf

1、論文一:TNFα影響結(jié)腸環(huán)形平滑肌細(xì)胞動(dòng)力的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制 目的:探討TNFα對(duì)結(jié)腸平滑肌細(xì)胞舒縮功能的影響和其發(fā)揮作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑.方法:采用平滑肌細(xì)胞長(zhǎng)度測(cè)定和激光掃描共聚焦顯微鏡鈣測(cè)定技術(shù),觀測(cè)①不同濃度（1,5,10,50ng/ml )TNFα對(duì)平滑肌細(xì)胞細(xì)胞長(zhǎng)度和[Ca<'2+>]<,i>的影響.②TNFα與平滑肌細(xì)胞孵育,平滑肌細(xì)胞對(duì)不同濃度KCL、ACH反應(yīng)的變化,③使用PD-98059（ERK MAPK抑制劑）、mano

2、alide（磷酯酶A2抑制劑）對(duì)TNFα引起平滑肌細(xì)胞反應(yīng)性變化的影響.結(jié)論：雖然TNFα對(duì)平滑肌細(xì)胞的收縮和[Ca<'2+>]<,i>沒(méi)有直接影響,但TNFα可輔助增強(qiáng)G蛋白偶聯(lián)的鈣敏感性調(diào)節(jié),可能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是通過(guò)ERK MAPK激活磷脂酶A<,2>產(chǎn)生花生四烯酸,增強(qiáng)G蛋白偶聯(lián)的鈣敏感性調(diào)節(jié).論文二：TNFα刺激結(jié)腸平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制 目的：探討TNFα刺激結(jié)腸平滑肌細(xì)胞生成NO的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑.方法：NO測(cè)定采

3、用Gresis法,iNOSmRNA表達(dá)的測(cè)定采用RT-PCR法,iNOS表達(dá)和NF-κB核漿的移位的檢測(cè)采用免疫熒光技術(shù)檢測(cè).觀測(cè)TNFα刺激下,平滑肌細(xì)胞NO生成量、iNOSmRNA、iNOS表達(dá)的變化,NF-κB核漿移位;以及應(yīng)用L-NiL和MG115后,上術(shù)指標(biāo)的變化情況.結(jié)論：TNFα刺激平滑肌細(xì)胞后通過(guò)活化NF-κB,啟動(dòng)iNOSmRNA的轉(zhuǎn)錄和iNOS蛋白翻譯,隨之催化NO生成.表明胃腸道平滑肌細(xì)胞在胃腸動(dòng)力障礙的發(fā)生中,不

4、僅僅是被動(dòng)的“靶器官”,更重要的是作為一種主動(dòng)的“效應(yīng)器”來(lái)發(fā)揮作用.論文三：大黃素收縮結(jié)腸環(huán)形平滑肌細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究 目的：探討大黃素對(duì)結(jié)腸環(huán)形平滑肌細(xì)胞的收縮作用,和它升高[Ca<'2+>]<,i>的機(jī)制以及大黃素發(fā)揮作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑.方法：采用平滑肌細(xì)胞長(zhǎng)度測(cè)定、胞漿游離鈣測(cè)定技術(shù)以及激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù),①觀測(cè)大黃素對(duì)平滑肌細(xì)胞長(zhǎng)度的影響;②觀測(cè)Heparine、Ryanodine、Nifedipine等對(duì)大黃素鈣動(dòng)員