體外培育牛黃對(duì)海人酸致癇大鼠的干預(yù)作用.pdf

1、目的：大鼠海馬局部注射海人酸，誘導(dǎo)建立顳葉癲癇大鼠模型，給予體外培育牛黃、卡馬西平干預(yù)，觀察大鼠的行為學(xué)、腦電圖改變和病理學(xué)改變，分析體外培育牛黃對(duì)顳葉癲癇大鼠的干預(yù)作用，探討其可能的作用機(jī)制，了解體外培育牛黃治療人類顳葉癲癇的可能性。 方法： 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：雄性Witar大鼠68只，體重280～300g，隨機(jī)分四組，分別為：癲癇模型組(第1組)、體外培育牛黃組(第2組)、卡馬西平組(第3組)：各22只：海馬CA3

2、腹后區(qū)定位組(第4組)2只。 2.通過(guò)腦立體定向技術(shù)，向大鼠海馬腹后區(qū)注射海人酸，建立顳葉癲癇動(dòng)物模型，觀察其癇性發(fā)作級(jí)別，發(fā)作等級(jí)在Ⅲ級(jí)～Ⅴ級(jí)的大鼠進(jìn)入本實(shí)驗(yàn)。 3.給藥方法：按Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)判定造模成功，入選各組后，第2組(體外培育牛黃組)及第3組(卡馬西平組)即首次給藥，第1組(模型組)給予相同量生理鹽水。 1)第4組(海馬CA3腹后區(qū)定位組)：進(jìn)針后注入美藍(lán)(亞甲藍(lán))，術(shù)后10小時(shí)處死大鼠，對(duì)照大鼠

3、腦立體定向圖譜，觀察定位準(zhǔn)確性。 2)各組正常飼料喂養(yǎng)。 3)癲癇模型組用灌胃器灌注生理鹽水2ml，1/日，共三天。 4)卡馬西平組：用灌胃器灌注卡馬西平0.1g，1/日，共三天。 5)體外培育牛黃組：用灌胃器灌注人工牛黃0.1g，1/日，共三天。 4、觀察指標(biāo)：觀察大鼠行為學(xué)變化，腦電圖改變，測(cè)定大鼠海馬CA3區(qū)殘留錐體細(xì)胞、GABA能神經(jīng)元的的數(shù)量及海馬CA3區(qū)苔狀纖維的變化。 5、統(tǒng)

4、計(jì)分析：所有數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用S-N-K法(P<0,05)。 結(jié)果： 1、行為學(xué)：反復(fù)癇性自發(fā)發(fā)作，每周發(fā)作1-3次，均為1-3級(jí)發(fā)作。體外培育牛黃組、卡馬西平組癲癇發(fā)作次數(shù)少于模型組，并且明顯的活動(dòng)量多，體重恢復(fù)快。 2、腦電圖：3天組大鼠手術(shù)側(cè)顳區(qū)出現(xiàn)棘波發(fā)放，7天組擴(kuò)展至對(duì)側(cè)區(qū)域，并發(fā)展為周期性叢集性慢波，30天組大鼠左右側(cè)幾乎同時(shí)出現(xiàn)陣發(fā)

5、棘波發(fā)放。同模型組相比，體外培育牛黃組、卡馬西平組腦電圖表現(xiàn)癲癇波發(fā)放明顯較少。 3、HE染色：術(shù)后3天，3組大鼠手術(shù)側(cè)海馬CA3區(qū)出現(xiàn)明顯的神經(jīng)元變性和壞死。術(shù)后7天,CA3區(qū)分層結(jié)構(gòu)逐漸紊亂甚至消失，壞死灶周圍可見(jiàn)較多淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。術(shù)后30天，手術(shù)側(cè)CA3區(qū)錐體細(xì)胞顯著丟失。手術(shù)側(cè)CA3區(qū)受損最重，CA1區(qū)次之，齒狀回及對(duì)側(cè)神經(jīng)元受損最輕。手術(shù)側(cè)海馬CA3區(qū)殘存的細(xì)胞數(shù)三組間兩兩比較差別均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，p<0.01。說(shuō)

6、明體外培育牛黃及卡馬西平均對(duì)CA3區(qū)錐體細(xì)胞有保護(hù)作用，但效果略差于卡馬西平。 4、免疫組化顯示：GABA能陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目三組間兩兩比較差別均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。當(dāng)已形成致癇灶，GABA能抑制性中間神經(jīng)元數(shù)目越多，后期癇性發(fā)作的被抑制可能性越大。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，同模型組相比，體外培育牛黃對(duì)CA3區(qū)GABA能抑制性中間神經(jīng)元作用有明顯的保護(hù)作用，但效果不及卡馬西平。 5、手術(shù)側(cè)海馬CA3區(qū)苔狀纖維分布面積的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：牛

7、黃組與模型組相比p<0.01，兩組差別有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：牛黃組與卡馬西平組相比p>0.1，兩組差別無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩治療組CA3區(qū)苔狀纖維分布的面積的統(tǒng)計(jì)結(jié)果與CA3區(qū)殘存錐體細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)結(jié)果不一致。提示，體外培育牛黃除有保護(hù)CA3區(qū)錐體細(xì)胞的作用外，還可能在苔狀纖維側(cè)支生芽的其他機(jī)制上發(fā)揮影響，確切機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。 結(jié)論： 1、向一側(cè)海馬腹側(cè)注射海人酸能成功建立顳葉癲癇模型。 2、體外培育牛黃組大鼠在毛

8、色光澤、活動(dòng)量、采食水及等方面明顯優(yōu)于模型組，提示：體外培育牛黃能明顯改善致癇鼠的行為學(xué)表現(xiàn)；還可降低大鼠致癇后的防御反應(yīng)分級(jí)，減少致癇鼠的癲癇波發(fā)放。 3、本實(shí)驗(yàn)證實(shí)，體外培育牛黃可以減輕KA致癇大鼠的神經(jīng)病理學(xué)改變，保護(hù)海馬結(jié)構(gòu)的神經(jīng)元，尤其對(duì)海馬CA3區(qū)影響最大。 4、體外培育牛黃對(duì)CA3區(qū)GABA能抑制性中間神經(jīng)元有明顯的保護(hù)作用。 5、體外培育牛黃除有保護(hù)CA3區(qū)錐體細(xì)胞的作用外，還可能在苔狀纖維側(cè)支生