蠟質(zhì)基因啟動子引導(dǎo)gus基因及水稻谷蛋白Gt1基因表達載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化水稻研究.pdf

1、在本文綜述中介紹了啟動子在轉(zhuǎn)基因水稻研究中的應(yīng)用。從轉(zhuǎn)基因水稻的研究和應(yīng)用角度考慮認為，利用組織器官特異性和誘導(dǎo)型啟動子有助于對外源基因表達施行時間、空間上的調(diào)控，并提出啟動子在改良水稻品質(zhì)研究中具有廣泛的應(yīng)用前景。 本研究在分別從中花11和湘晴水稻品種基因組中克隆獲得谷蛋白Gt1全基因序列的基礎(chǔ)上，對這兩種Gt1基因序列與GenBank(Y00687)公布的Gt1基因(Mangetsumochi水稻品種)分別進行比對。中花11

2、與Mangetsumochi水稻的Gt1編碼序列完全相同，而湘晴水稻的Gt1基因編碼序列與Mangetsumochi水稻有一個核苷酸差異，使湘晴水稻Gt1谷蛋白的第46位精氨酸(Arg)改變?yōu)楣劝滨０?Gln)。本研究以來源于秈稻232品種2.8kb蠟質(zhì)基因(Waxy)啟動子，分別與gus報告基因和中花11水稻品種的Gt1全基因構(gòu)建成p1300-HWG和pCAMBIA1301-Waxy-Gt1兩種重組表達載體。在根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)下將兩種表

3、達載體導(dǎo)入水稻，分別得到12棵和13棵轉(zhuǎn)基因植株，利用PCR檢測證明兩種重組質(zhì)粒的T-DNA已分別整合到相應(yīng)轉(zhuǎn)基因植株的基因組中。 本研究還將轉(zhuǎn)化Waxy基因啟動子引導(dǎo)gus報告基因與本實驗室曾利用35S啟動子引導(dǎo)gus報告基因獲得的兩種T1代水稻種子的GUS染色結(jié)果進行比較。由35S啟動子引導(dǎo)的gus報告基因水稻的GUS顯色主要分布在稻米的周圍，而采用Waxy基因啟動子引導(dǎo)gus報告基因水稻的GUS顯色均勻分布在整個稻米的橫切