小麥儲(chǔ)藏蛋白基因Avenin-like b啟動(dòng)子的克隆及表達(dá)載體構(gòu)建.pdf

1、小麥avenin-like b是最近發(fā)現(xiàn)的一類(lèi)胚乳特異性表達(dá)蛋白質(zhì)，被稱為小麥“低分子量麥醇蛋白”，這類(lèi)蛋白質(zhì)富含有半胱氨酸殘基，可以形成分子間或者分子內(nèi)的二硫鍵，通過(guò)這種二硫鍵的作用形成蛋白質(zhì)聚合體。因此，推測(cè)這類(lèi)蛋白在小麥的加工品質(zhì)中有可能起著很重要的作用。本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)分離獲得了多個(gè)小麥avenin-like b基因，并對(duì)其表達(dá)特性進(jìn)行了研究。本研究在此基礎(chǔ)上，分離得到了avenin-like b基因的上游啟動(dòng)子序列，并成功的構(gòu)建了

2、5種avenin-like b啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的gus基因表達(dá)載體，為應(yīng)用遺傳轉(zhuǎn)化的方法分析該啟動(dòng)子表達(dá)特性奠定了基礎(chǔ)。
　　 主要研究結(jié)果如下：
　　 1)采用反向的PCR技術(shù)，獲得了avenin-like b基因上游的啟動(dòng)子全長(zhǎng)序列1664bp。
　　 2)通過(guò)應(yīng)用PLACE和plantCARE等數(shù)據(jù)庫(kù)分析分離的啟動(dòng)子元件，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該啟動(dòng)子除了具備啟動(dòng)子的基本元件TATA-box、CAAT-box等，還含有胚

3、乳特異性表達(dá)的元件如：GCN4、TGTAAAG、Skn1-motif、AACA等。
　　 3)為了分析鑒定上述啟動(dòng)子元件的作用，分別構(gòu)建了啟動(dòng)子全長(zhǎng)（1664bp）的表達(dá)載體pALP17及5，端缺失的不同長(zhǎng)度啟動(dòng)子（1000bp、800bp、600bp、300bp）的表達(dá)載體。
　　 小麥胚乳特異性啟動(dòng)子的分離和功能鑒定有助于深入研究種子的發(fā)育機(jī)制以及儲(chǔ)藏蛋白基因的表達(dá)調(diào)控機(jī)制，分離并鑒定出具有高效的胚乳特異性表達(dá)的啟