廣東省鴨疫里氏桿菌耐藥性調(diào)查及floR傳播分子特征研究.pdf

1、鴨疫里氏桿菌感染具有發(fā)病率高、死亡率高的特點，是目前引起世界范圍內(nèi)水禽感染的重要疾病，同時也是造成養(yǎng)鴨業(yè)經(jīng)濟損失的主要疾病之一。由于鴨疫里氏桿菌極易產(chǎn)生耐藥性，因此給臨床治療帶來了極大的困擾。目前關(guān)于鴨疫里氏桿菌耐藥性的研究報道還比較少，尤其是關(guān)于分子耐藥機制和傳播機制的研究鮮有報道。
　　2013年2月至2015年7月，從廣東省9個地區(qū)收集具有典型鴨疫里氏桿菌病癥狀的?。ㄋ溃喓往Z的腦、肝組織樣品，分離培養(yǎng)鴨疫里氏桿菌。采用特異

2、性 PCR方法進行分子學(xué)鑒定，同時采用全自動微生物鑒定儀來鑒定疑似菌株，共分離得到115株鴨疫里氏桿菌，其中鴨源54株，鵝源61株。用瓊脂二倍稀釋法測定32種抗菌藥物的敏感性。藥敏結(jié)果顯示，分離株有很高的耐藥性，有103株（89.6％）鴨疫里氏桿菌分離株存在多重耐藥現(xiàn)象。
　　采用PCR和測序方法對115株分離菌進行了耐藥基因和整合子類型檢測和分析。結(jié)果顯示：共有5大類抗生素的25種耐藥基因被檢測出來。在鴨疫里氏桿菌分離株中首次檢

3、測出三種氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶基因 aph(3’)-Ⅱ、aph(3’)-Ⅳ、aph(4’)-Ⅰa，氨基糖苷轉(zhuǎn)移酶基因aadB，紅霉素耐藥基因ermB、ermC和磺胺類抗菌藥物耐藥的sul3。9株鴨疫里氏桿菌株含有1類整合子，其中6株攜帶978bp大小的aadA2基因盒和3株攜帶2287bp大小的aac(6’)-Ⅱ-catB3-aadA1基因盒。
　　對分離得到的菌株進行SmaI-PFGE分子分型，共有58株分型成功，得到16種不同的S

4、maI-PFGE型（以相似度≥90%為判定標準），包括11個簇和5個單一型。本研究中的鴨疫里氏桿菌分離株存在廣泛的克隆傳播，且克隆傳播存在于不同種屬的宿主動物（鴨和鵝）間及相同、不同地區(qū)間分離到的菌株中。
　　為探究抗生素耐藥性與生物膜的相關(guān)性，用結(jié)晶紫染色的方法定量測定生物膜形成能力。結(jié)果表明，有95（82.6%）株鴨疫里氏桿菌分離株具有產(chǎn)膜能力，其中40（34.8%）株是強產(chǎn)膜菌株，且對12~23種抗菌藥物具有抗藥性；25（2

5、1.7%）中等產(chǎn)膜株和30（26.1%）弱產(chǎn)膜菌株可對7~12種種抗菌藥物耐藥。20（17.4%）株沒有產(chǎn)膜能力，耐藥種數(shù)小于等于6種?？梢钥闯錾锬ば纬赡芰εc耐藥譜的種數(shù)之間存在一定的關(guān)系。
　　此外，通過S1-PFGE和雜交的方法確定鴨疫里氏桿菌中floR基因既位于染色體上也位于質(zhì)粒上，發(fā)現(xiàn)在13株鴨疫里氏桿菌中存在一個新型攜帶floR基因的質(zhì)粒，其大小>23kb，與之前的報道的質(zhì)粒不同。通過接合轉(zhuǎn)移和質(zhì)粒穩(wěn)定性實驗等方法證明