成骨不全I(xiàn)型膠原編碼基因的分子遺傳學(xué)研究.pdf

1、目的
　　 通過(guò)分析成骨不全遺傳家系或散發(fā)病例家庭的臨床特征,檢測(cè)COL1A1和COL1A2基因,尋找突變位點(diǎn),初步探討我國(guó)OI基因突變的類(lèi)型,建立成骨不全基因診斷方法,為進(jìn)一步探討OI的發(fā)病機(jī)制及基因治療,提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料和方法
　　 收集5個(gè)成骨不全家系和3個(gè)散發(fā)病例成骨不全家庭,共8組研究對(duì)象,研究其臨床特征及家系圖譜。選取COL1A1基因,COL1A2基因作為研究的目的基因；提取患者外周血白細(xì)胞

2、的全基因組DNA；根據(jù)該基因外顯子的大小、排列特點(diǎn)及堿基結(jié)構(gòu),用引物設(shè)計(jì)軟件Primer premier5.0設(shè)計(jì)引物:COL1A1基因21對(duì)；COL1A2基因33對(duì)。對(duì)COL1A1基因和COL1A2基因的啟動(dòng)子區(qū)域、全部外顯子及外顯子一內(nèi)含子交界區(qū),進(jìn)行PCR擴(kuò)增,產(chǎn)物直接測(cè)序分析。
　　 設(shè)立對(duì)照:家系內(nèi)對(duì)照、正常人群對(duì)照。對(duì)照組進(jìn)行目的片段PCR擴(kuò)增,直接測(cè)序分析或計(jì)算機(jī)輔助限制性內(nèi)切酶酶切位點(diǎn)檢測(cè)分析。
　　 結(jié)

3、果
　　 1.8組成骨不全研究對(duì)象例的臨床特征(表A)及COL1A1基因和COL1A2基因突變情況(表B,C)。
　　 2.對(duì)COL1A1和COL1A2基因內(nèi)含子的研究發(fā)現(xiàn):先癥者COL1A1基因第31內(nèi)含子第128位堿基G→C突變率和COL1A2基因第30內(nèi)含子第162位堿基G→A突變率較正常人群高,提示可能與成骨不全臨床表現(xiàn)異質(zhì)性有關(guān)。
　　 結(jié)論
　　 1.本研究發(fā)現(xiàn)一個(gè)新的致病突變:Ⅰ型膠原編碼基

4、因COL1A1,第1外顯子,第97位堿基(G→A)突變,可使其的編碼氨基酸由天冬氨酸突變?yōu)樘於０?。說(shuō)明除甘氨酸外,其它氨基酸的突變也是中國(guó)人群成骨不全病因之一。
　　 2.本研究發(fā)現(xiàn)2個(gè)新的Ⅰ型膠原COL1A1基因編碼區(qū)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)分別為:COL1A1第19號(hào)外顯子第1209位堿基(T→A)和COL1Al第48號(hào)外顯子第3702位堿基(C→T)。提示中國(guó)人群成骨不全患者編碼區(qū)也存在單核苷酸多態(tài)性。是對(duì)Ⅰ型膠原SNP數(shù)據(jù)庫(kù)

5、補(bǔ)充。
　　 3.成骨不全基因型和表現(xiàn)型關(guān)系復(fù)雜,發(fā)生同一位置、同一形式突變的不同個(gè)體,臨床表現(xiàn)不盡相同。這可能與不同個(gè)體生存環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)環(huán)境、遺傳環(huán)境有關(guān)。
　　 4.沒(méi)有檢測(cè)出Ⅰ型膠原編碼基因COL1A1和COL1A2突變的成骨不全患者,其基因突變位置可能位于CRTAP基因和/或LEPRE1基因上。
　　 5.對(duì)COL1A1和COL1A2基因內(nèi)含子的研究發(fā)現(xiàn),先癥者COL1A1基因第31內(nèi)含子第128位堿基G→