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1、目的:在E.coli中獲取高效可溶性、高純度的重組Survivin融合蛋白;建立基于Survivin重組融合蛋白的anti-Survivin的血清檢測方法,為Survivin的深入研究及腫瘤的診斷奠定基礎。 方法:通過氨芐青霉素抗性、PCR和重組質(zhì)粒雙酶切對重組質(zhì)粒PET32-Survivin進行鑒定;將重組質(zhì)粒PET32-Survivin轉(zhuǎn)化BL21感受態(tài)細胞,通過氨芐青霉素抗性、PCR和PET32-Survivin重組質(zhì)粒雙
2、酶切篩選重組子轉(zhuǎn)化菌落,經(jīng)DNA測序及BLAST比對確認Survivin基因序列正確性以及插入PET32質(zhì)粒的位點和方向;IPTG誘導表達、Western blotting鑒定,鎳離子金屬螯合層析柱純化重組融合蛋白;建立基于重組融合蛋白Survivin特異性抗體的檢測方法,并對300份正常人血清、144份腫瘤患者血清進行了檢測。 結(jié)果:Survivin DNA定向插入了pET32質(zhì)粒:獲得了高效、可溶性重組Survivin融合蛋
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