體外通過細胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞分化的條件初探.pdf

1、【目的】誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)向軟骨細胞分化一直是軟骨組織工程的熱點問題，但這一研究卻面臨誘導(dǎo)的軟骨細胞在體內(nèi)無法長期維持其軟骨細胞表型，以及誘導(dǎo)需要消耗大量昂貴的生長因子的難題。本研究通過將BMSCs與軟骨細胞共培養(yǎng)，觀察軟骨細胞能否對BMSCs向軟骨細胞分化起誘導(dǎo)作用，并且比較共培養(yǎng)中不同培養(yǎng)條件對BMSCs向軟骨細胞分化的差別。 【方法】選擇4月齡馬來豬，分別從股骨與膝關(guān)節(jié)中取出骨髓與軟骨組織，并進一步分離出B

2、MSCs與軟骨細胞。對原代BMSCs與軟骨細胞在含血清培養(yǎng)液中進行擴增培養(yǎng)。1)BMSCs與軟骨細胞的P2代細胞進行共培養(yǎng)，以BMSCs：軟骨細胞為4：1，細胞總密度0．5×104cell／cm2，接種于培養(yǎng)皿內(nèi)，以BMSCs單獨培養(yǎng)，軟骨細胞單獨培養(yǎng)，軟骨細胞低密度單獨培養(yǎng)作為對照組，再將所有實驗組的細胞培養(yǎng)于不同培養(yǎng)液(含血清培養(yǎng)液或無血清培養(yǎng)液)中。對培養(yǎng)第7、14、21天的細胞進行倒置相差顯微鏡、H&E染色以及免疫熒光標(biāo)記II型

3、膠原觀察。2)將共培養(yǎng)7天初步融合的共培養(yǎng)組細胞進行傳代，待再次融合后用倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)。 【結(jié)果】1)根據(jù)倒置相差顯微鏡與H&E染色對細胞形態(tài)的觀察，BMSCs的形態(tài)為成纖維細胞樣，軟骨細胞為橢圓形或多角形。在兩種培養(yǎng)液中的共培養(yǎng)組細胞隨培養(yǎng)時間的延長，細胞形態(tài)由梭形，逐漸轉(zhuǎn)變成橢圓形與多角形，但是在無血清培養(yǎng)液中，細胞數(shù)目沒有明顯增加。根據(jù)免疫熒光結(jié)果，在BMSCs中工I型膠原表達陰性，軟骨細胞II型膠原表達陽性，