基因芯片技術(shù)分析IgA腎病發(fā)展相關(guān)的基因及功能初探.pdf

1、IgA腎病是原發(fā)性腎小球疾病中常見的病理類型，平均每年有2％～3％的病人發(fā)生終末期腎衰，是終末期腎衰的主要原因之一。目前腎活檢是唯一確診依據(jù),免疫損傷造成的形態(tài)學(xué)證據(jù)可以反映腎功能損害程度。IgA或其循環(huán)免疫復(fù)合物在腎小球系膜區(qū)沉積,引起腎小球病理損害,產(chǎn)生一系列臨床癥狀。腎穿刺病理活檢是目前診斷腎臟疾病最可靠的方法。但腎穿刺活檢術(shù)是一種創(chuàng)傷性檢查，對于腎臟組織有一定的傷害，對病人也會帶來一定的痛苦和不便。 對IgA腎病病機(jī)理的

2、研究是腎小球疾病發(fā)病機(jī)理研究中最活躍、最豐富的領(lǐng)域之一。但由于發(fā)病機(jī)制仍然不明,迄今為止尚無特殊治療藥物。近年來大量研究表明，表觀遺傳學(xué)變化與幾類疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，主要包括癌癥、免疫缺陷病及自身免疫性疾病。為了研究IgA腎病和表觀遺傳學(xué)上的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)采用采用染色質(zhì)免疫沉淀聯(lián)合芯片技術(shù)(ChIP—chip)在全基因組范圍內(nèi)對IgA腎病外周血的組蛋白H3賴氨酸4(H3K4)進(jìn)行高通量的檢測。隨后采用染色質(zhì)免疫沉淀—實(shí)時定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)(

3、ChIP—qPCR)驗(yàn)證芯片結(jié)果，定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)(qRT—PCR)檢測H3K4顯著差異基因的mRNA表達(dá)水平。用統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行基因篩選。本研究將有助于進(jìn)一步闡明IgA腎病的病因?qū)W及發(fā)病機(jī)制，加深對這種疾病病因的理解，有助于進(jìn)一步探討IgA腎病治療策略的潛在發(fā)展方向，為發(fā)展新的IgA腎病治療方法可能提供一個非常重要的線索。因此，本研究具有重要的理論價(jià)值，實(shí)際價(jià)值和臨床應(yīng)用價(jià)值。主要實(shí)驗(yàn)和結(jié)果如下： 1、選用UNH Micro

4、array Centre公司的檢測細(xì)胞組蛋白甲基化的基因芯片（含有人類12191個基因探針）對IgA腎病患者外周血的組蛋白H3K4進(jìn)行了高通量的檢測分析。將IgA腎病活動期患者與健康者的組蛋白H3K4狀態(tài)進(jìn)行了比較，結(jié)果我們觀察到1016個探針H3K4有顯著差異。其中450個探針甲基化上調(diào)表達(dá)，566個探針甲基化下調(diào)表達(dá)。 2、從表達(dá)量差異在2倍以上的361個基因中選取了4個基因作為驗(yàn)證芯片結(jié)果的候選基因。4個基因分別是上調(diào)表達(dá)

5、的基因：BX647504，DTNA；下調(diào)表達(dá)的基因：NOLA1，PTPRN2。通過染色質(zhì)免疫共沉淀-實(shí)時熒光定量聚合酶聯(lián)反應(yīng)(ChIP-qPCR)，定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)(qRT—PCR)檢測H3K4顯著差異基因的mRNA表達(dá)水平來驗(yàn)證芯片結(jié)果。結(jié)果顯示：BX647504，DTNA，NOLA1，PTPRN2四個候選基因中變化趨勢跟芯片結(jié)果一致。 3、通過Affymetrix、GenBank，dbEST，and RefSeq等網(wǎng)站