頭孢喹肟在兔體內(nèi)對金黃色葡萄球菌耐藥突變選擇窗研究.pdf

1、為了探索不同的給藥方案與耐藥菌株選擇富集的關系，本文采用兔組織籠感染模型研究頭孢喹肟藥動藥效同步參數(shù)與金黃色葡萄球菌敏感性變化的聯(lián)系，希望提供明確的證據(jù)來表明體內(nèi)存在一個藥物濃度范圍會誘導細菌耐藥，從而為臨床防止耐藥提供合理的給藥方案。
　　本文通過外科手術法，在兔體內(nèi)植入高爾夫練習球后，超過1010CFU的金黃色葡萄球菌 ATCC29213被打入到高爾夫球中，監(jiān)測球內(nèi)細菌濃度，對細菌濃度保持在108CFU/ml以上者視為成功建立

2、了兔組織籠感染模型。根據(jù)預實驗結果，選用34只兔子，共34個組織籠，隨機分為8個劑量組進行臀部肌肉注射頭孢喹肟，分別是4、8、16、32mg/kg體重一天一次以及4、8、16、24mg/kg體重一天兩次，連續(xù)給藥5次，空白組以相同方式注射滅菌生理鹽水。對于一天一次給藥劑量組，按每次給藥后2、4、6、8、10、12、24h收集組織液，對于一天兩次給藥劑量組，按每次給藥后2、4、6、8、10、12h收集組織液，每次吸取0.5mL用于檢測組織

3、籠中的藥物濃度。每個組織籠在給藥前，給藥過程中和給藥后（一天一次給藥為24h、48h和72h，一天兩次給藥為12h、24h和48h）收集組織液1mL，其中0.4mL用于MIC的測定，0.6mL用于測定細菌含量變化和突變分數(shù)。
　　采用瓊脂稀釋法測定了頭孢喹肟對金黃色葡萄球菌的MIC、MIC99和 MPC分別為0.5μg/mL、0.3μg/mL、1.6μg/mL，采用微量稀釋法測定了體外空白組織液中頭孢喹肟對金黃色葡萄球菌的MIC為

4、0.5μg/mL。采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法檢測組織液中藥物濃度，使用WinNonlin5.2軟件處理藥動藥效數(shù)據(jù)，經(jīng)過多次給藥后，兩種給藥間隔的主要藥動學參數(shù) AUC范圍分別為5.590~69.782μg·h/mL和6.874~55.558μg·h/mL；Cmax范圍分別為0.308~2.477μg/mL和0.513~3.030μg/mL。相比于空白對照組的細菌含量保持穩(wěn)定外，給藥劑量組都有不同程度地下降，說明頭孢喹肟對金黃色

5、葡萄球菌有較好的抑制作用，但當％T>MIC99≥70%或%T>MPC<58%時，檢測到組織籠中產(chǎn)生了耐藥菌。另外，其他的PK/PD參數(shù)也顯示與細菌耐藥性相關，當AUC/MIC99在61.33-185.19h之間，AUC/MPC在11.50-34.72h之間，Cmax/MIC99在2.27-10.1之間或Cmax/MPC在0.43-1.89之間時，這些組織籠同樣產(chǎn)生了耐藥菌。
　　從1×MIC含藥平板隨機挑選8株耐藥菌，并與1株原始

6、敏感菌（剛開始打入兔組織籠中的金黃色葡萄球菌ATCC29213）采用脈沖場凝膠電泳（PFGE）進行基因分型，確定菌株之間的親緣關系，使用BioNumerics軟件進行聚類分析，以90%以上相似度為相同PFGE型。結果表明8株耐藥株的MIC為1-2μg/mL，并且上述9株菌有相同的PFGE型，顯然，獲得的耐藥菌株來源于敏感菌株。
　　上述實驗結果證明了頭孢喹肟作為時間依賴性藥物在體內(nèi)存在一個藥物濃度范圍（MSW）會誘導低水平耐藥的金