抗乙型肝炎病毒藥物靶標(biāo)的篩選和驗(yàn)證.pdf

1、乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范圍的嚴(yán)重公共衛(wèi)生問題之一，但是目前沒有特效防治方法，存在的關(guān)鍵問題在于HBV基因組較小，易發(fā)生突變，限制了靶向病毒的抗病毒藥物的發(fā)展。最近的研究表明，抑制宿主細(xì)胞中某些蛋白的功能可以阻斷病毒感染。與病毒基因組相比，人類基因組序列中可能包括更多與病毒復(fù)制有關(guān)的基因。應(yīng)用DNA微陣列(芯片)技術(shù)系統(tǒng)分析宿主基因表達(dá)，是一種從宿主細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)潛在抗病毒靶標(biāo)的有效方法。因此，本課題旨在應(yīng)用基因芯片技術(shù)篩選和驗(yàn)證宿

2、主細(xì)胞內(nèi)潛在的抗HBV藥物作用靶標(biāo)，為新型抗病毒藥物的篩選奠定基礎(chǔ)。 本研究利用人類全基因組芯片比較了HepG2.2.15細(xì)胞與HepG2細(xì)胞表達(dá)譜差異，并研究了HepG2．2．15細(xì)胞經(jīng)抗HBV藥物干預(yù)前后細(xì)胞基因表達(dá)譜變化情況，篩選出在HBV感染后差異表達(dá)、而藥物干預(yù)后表達(dá)逆轉(zhuǎn)的基因，獲得了可能的HBV感染關(guān)鍵分子。通過RT-PCR、Western印跡技術(shù)驗(yàn)證以及生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)ABHD2、EREG、ACVR2B、CDC3

3、4、KHDRBS3、RORA可能成為肝細(xì)胞內(nèi)潛在的抗HBV藥物作用靶標(biāo)。在此基礎(chǔ)上，應(yīng)用反義技術(shù)等途徑抑制肝細(xì)胞中上述基因的表達(dá)或功能，發(fā)現(xiàn)只有當(dāng)ABHD2、EREG的表達(dá)受到抑制時(shí)，HepG2．2．15細(xì)胞內(nèi)HBV的復(fù)制才受到明顯抑制，為證明ABHD2和EREG成為抗HBV藥物作用靶點(diǎn)的可能性提供了有力證據(jù)。由于多靶點(diǎn)聯(lián)合治療已逐漸成為抗乙型肝炎病毒治療中的熱點(diǎn)，在前期工作的基礎(chǔ)上將以前篩選出的抗HBV感染的作用靶標(biāo)ASGPR、Fib