砷劑誘導(dǎo)骨髓瘤SOCS-1基因去甲基化作用的研究.pdf

1、【研究背景】多發(fā)性骨髓瘤（MM）是一類白介素-6（IL-6）依賴的，以大量惡性單克隆漿細(xì)胞增殖為特點(diǎn)的腫瘤性疾病。細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子-1——SOCS-1蛋白與淋巴細(xì)胞的發(fā)生發(fā)育密切相關(guān)，在MM的病理機(jī)制中起著重要作用。 砷劑（AS2O3）在MM治療中具一定潛力，最近一項(xiàng)新的機(jī)制提出，AS2O3的治療作用可能與其誘導(dǎo)細(xì)胞抑癌基因去甲基化作用有關(guān)，具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。我們擬從細(xì)胞分子生物學(xué)水平研究體外骨髓瘤細(xì)胞內(nèi)SOCS-

2、1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)，探討AS2O3誘導(dǎo)SOCS-1基因去甲基化作用及可能機(jī)制，分析AS2O3對(duì)SOCS-1基因甲基化水平、基因表達(dá)水平和對(duì)細(xì)胞內(nèi)JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響及其與骨髓瘤細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期改變的相關(guān)性研究，為闡明AS2O3治療MM的可能機(jī)制提供新的思路和研究方向。 【方法】 應(yīng)用MTT法觀察AS2O3對(duì)骨髓瘤細(xì)胞U266、RPMI8226、CZ-1增殖的影響，甲基特異性PCR法檢測骨髓瘤細(xì)胞在

3、AS2O3作用72小時(shí)前后，SOCS-1基因甲基化狀態(tài)的改變情況，RT-PCR結(jié)合實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測用藥前后細(xì)胞內(nèi)SOCS-1基因mRNA的表達(dá)變化。Western blot法檢測AS2O3處理前后細(xì)胞內(nèi)P-STAT3蛋白的表達(dá)差異。流式細(xì)胞技術(shù)檢測分析用藥前后，細(xì)胞周期的改變情況和對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。 【結(jié)果】 ①AS2O3作用72小時(shí)后，骨髓瘤細(xì)胞U266、RPMI8226、CZ-1生長明顯受抑，細(xì)胞周期發(fā)生G0/G1期阻

4、滯，早期、晚期細(xì)胞凋亡比率明顯升高，呈現(xiàn)AS2O3濃度劑量依賴。②骨髓瘤細(xì)胞內(nèi)SOCS-1基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島均存在不同程度的基因甲基化，基因沉默的現(xiàn)象。AS2O3作用72小時(shí)后，SOCS-1基因甲基化程度明顯減弱至消失。③AS2O3作用72小時(shí)后，骨髓瘤細(xì)胞內(nèi)SOCS-1基因在m RNA水平上表達(dá)明顯上調(diào)，與野生型細(xì)胞相比，差異具有顯著性（P<0．05)，且與AS2O3濃度呈現(xiàn)正相關(guān)。④AS2O3作用72小時(shí)后，骨髓瘤細(xì)胞內(nèi)JAK/S