鈣離子拮抗劑尼莫同對大鼠急性放射性腦損傷保護作用的研究.pdf

1、目的：顱內腫瘤術后的放射治療是目前國內外腫瘤臨床治療普遍使用且行之有效的治療方法。放射治療設備包括60Co治療機、直線加速器、立體定向裝置，近距離后裝治療機。治療腫瘤的作用為世人所公認的，而副作用也是有目共睹的。部分放射損傷較輕微，而少部分放射損傷則較重，甚至造成病人重要組織器官和重要功能的不可逆的嚴重損傷。目前對顱內腫瘤放射治療后的放射性腦損傷的治療逐漸受到臨床醫(yī)師的重視，但治療方法和治療效果都不盡人意。如果能夠采用某些藥物預防放射性

2、腦損傷，并能夠使放射性腦損傷減少到最低的程度，這將對病人的預后及生存質量的提高有著十分重要的作用。本實驗將大鼠制備成急性放射性腦損傷實驗模型，通過給予鈣離子拮抗劑“尼莫同”干預，觀察“尼莫同”干預條件下大鼠放射性腦損傷的變化情況并分析其原因，以探討鈣離子拮抗劑“尼莫同”對大鼠放射性腦損傷的保護作用及可能的作用機制。 方法：取SD大鼠54只，雌雄不限，體重(200±20)g，用抽簽法隨機分為3組：A組：18只，正常對照組，不給予任

3、何射線及藥物干預措施；B組：18只，60Co照射，不給予任何藥物干預；C組：18只，60Co照射+尼莫同160 μg/Kg。于照射后1d，3d，7d，A、B、C組各取材6只，觀察腦組織含水量及Ca2+含量，以及大鼠腦組織蘇木素-伊紅(HE)染色及免疫組化染色后光鏡下組織學改變。照射條件：進行照射的B組及C組大鼠給予3.6％水合氯醛(10ml/Kg)經腹腔注射麻醉后，俯臥位固定于自制的“工”型木架上，光野上界設于雙眼后眥連線，下界設于雙耳

4、后連線，左右露空，然后將大鼠置于60Co治療機床，源皮距80cm，照射野大小為2×3cm2，60Co治療機源強為3644Ci，吸收劑量率為87.6cGy/min，單次照射劑量為20Gy，參考深度為2cm。B組不給予藥物干預；C組大鼠于放療后即刻給予尼莫同160 ug/Kg腹腔注射，隨后在處死前每一天同一時間點給予尼莫同160μg/Kg腹腔注射。照射后1d，3d，7d，進行腦組織含水量及Ca2+的測量：①每組隨機取大鼠3只，脫臼處死，快速

5、取出腦組織，電子天平稱濕重(W)后，置于處理過的器皿中，105℃恒溫干燥箱，烘烤24小時至恒重(D)，按Elliotl等的公式計算：腦組織含水量=[(W-D)/W]×100％；②腦組織Ca2+的測量，取上述烘干腦組織用濃硝酸和高氯酸(5:1)浸泡過夜，次日低溫加熱徹底消化，去離子水定容至5ml，全自動生化分析儀測定腦組織中Ca2+的含量。B、C組均按照射后時間點1d，3d和7d進行標本提取，每組隨機取3只，A組除不照射外取材各步驟及方法

6、同B、C組，進行蘇木素-伊紅(HE)染色及免疫組化染色后行病理學觀察。結果： 1腦組織病理學改變：A組1d、3d、7d時大鼠腦組織均未見異常改變，HE染色腦皮層下毛細血管無充血擴張，無腦水腫改變，大腦各部位結構及層次清楚，細胞形態(tài)結構清晰完整。在照射后1d，B、C組大鼠腦組織大體標本可見腦表蒼白、稍顯腫脹，B、C組大鼠HE染色可見腦皮層下毛細血管輕微充血擴張，有腦水腫改變，絕大部分神經細胞仍可保持典型的多極形狀、胞核居中、呈嗜堿

7、性染色；照射后3d，B、C組大鼠腦組織大體標本顯示腦表蒼白、腫脹，兩組未見明顯差別，B、C組大鼠HE染色可見腦皮層下毛細血管充血擴張，有腦水腫改變，腦白質淡染，大部分神經細胞仍可保持典型的多極形狀、胞核居中、呈嗜堿性染色。灰質無明顯病理學改變。但總體表現(xiàn)可看出C組大鼠腦水腫略輕于B組。照射后7d，B組大鼠腦組織大體標本顯示大鼠腦表蒼白、腫脹較前明顯加重，而C組較3d時無明顯加重，且輕于7d時的B組大鼠，此時B組大鼠HE染色可見腦皮層下毛

8、細血管明顯充血擴張，有明顯腦水腫改變，腦組織呈海綿狀，腦白質淡染，小血管周圍尤為明顯，部分神經細胞喪失典型的多極形狀而呈圓形、胞核偏位、呈嗜酸性染色?；屹|表現(xiàn)為血管和神經元周圍膠質細胞的腫脹；在任何時間段，A組大鼠Bcl-2與Bax的陽性表達百分比均較低，三個時間段的Bcl-2表達的陽性細胞百分數(shù)無統(tǒng)計學差異，Bax表達的陽性細胞百分數(shù)亦無統(tǒng)計學差異。B組在各時間段中Bcl-2的陽性細胞百分數(shù)有所升高，顯著高于A組同時間水平，隨后隨時間

9、延長逐漸下降，7d時陽性表達百分比最低，與1d時的陽性表達百分比之間存在顯著性差異；B組在各時間段中Bax的陽性表達百分數(shù)均有不同程度的升高，顯著高于A組同時間段水平；3d時B組大鼠腦組織Bax的陽性表達百分數(shù)最高，7d與3d時無顯著性差異。C組中各時間段的Bcl-2的陽性細胞百分數(shù)也高于A組，7d時的陽性細胞百分數(shù)顯著高于3d，且隨時間的延長Bcl-2陽性表達逐漸增多；C組各時間段的Bax的陽性表達百分比也高于A組，3d、7d的陽性百

10、分數(shù)明顯高于1d，但3d、7d兩者之間無明顯差異。 2腦組織含水量的變化：A組大鼠腦組織含水量在1d、3d、7d各時間段之間沒有顯著性差異(P>0.05)；B、C兩組大鼠腦組織含水量各自分別在3d、7d時與1d相比均有顯著性差異(P<0.05)，然而在3d與7d相比兩組均無顯著性差異(P>0.05)。照射后1d、3d和7d時B、C組腦組織含水量均高于A組，均有顯著性差異(P<0.05)，而B、C兩組之間在1d和3d時均無顯著性差異(P>

11、0.05)；而7d時B、C兩組有差異(P<0.05)。 3Ca2+含量的變化：A組大鼠腦組織Ca2+含量在1d、3d、7d各時間段之間沒有顯著性差異(P>0.05)；B組大鼠腦組織Ca2+含量在第3d時明顯高于1d(P<0.05)，第7d時明顯高于1d和3d(P<0.05)；C組大鼠腦組織Ca2+含量1d時與3d時無明顯差異(P>0.05)，1d時和7d亦無明顯差異(P>0.05)，但7d的Ca2+含量明顯低于3d，有顯著性差異