蘆丁-α-鼠李糖苷酶分離提純及酶反應(yīng)性質(zhì)的研究.pdf

1、異槲皮素是一種在植物中分布較廣的黃酮類化合物.異槲皮素在自然界中含量很低,制約了人們對異槲皮素進(jìn)行研究.利用微生物酶法,以蘆丁為前體物質(zhì)水解掉一個(gè)α-鼠李糖基,即可獲得異槲皮素.本文主要研究微生物sp.R9g產(chǎn)蘆丁-α-鼠李糖苷酶的分離提純,酶反應(yīng)條件,酶反應(yīng)性質(zhì),以及測定酶蛋白的N-端氨基酸序列.Sp.R9g的發(fā)酵粗酶液經(jīng)硫酸銨沉淀、透析后,利用DEAE-Cellulose DE52柱(Ф2.0×11.5)進(jìn)行分離提純,并進(jìn)一步用Bi

2、o-Rad陽離子交換柱純化,獲得了提純的蘆丁-α-鼠李糖苷酶.使用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳,得到單一單點(diǎn),該酶的分子量約為72kDa.對蘆丁-α-鼠李糖苷酶的酶反應(yīng)條件進(jìn)行了研究,其結(jié)果為:酶反應(yīng)的最佳底物濃度為1.0mg/ml,最佳酶反應(yīng)時(shí)間為18個(gè)小時(shí),最佳溫度是40℃,最適pH值是5.0.對蘆丁-α-鼠李糖苷酶的底物水解能力進(jìn)行了研究,結(jié)果提純的酶液對底物蘆丁有很高的酶活力,為41.3 U/ml;對底物pNPR和人參皂苷Re的酶

3、活力很低,分別為1.2 U/ml和0.9 U/ml.說明蘆丁-α-鼠李糖苷酶具有專一水解蘆丁的3-C上的1,6-α-鼠李糖苷鍵的特異性,是專一性酶.對蘆丁-α-鼠李糖苷酶做蛋白質(zhì)電印跡和蛋白質(zhì)N-端序列進(jìn)行測定,其N-端的16個(gè)氨基酸殘基依次為:Leu/Ser/Ala/Ala/Glu/Trp/Arg/Thr/Gln/Ser/Ile/Tyr/Phe/Leu/Leu/Thr,并測定提純的蘆丁-α-鼠李糖苷酶的蛋白質(zhì)純度為97％.以這段序列為