來源于節(jié)桿菌的β-D-半乳糖苷酶的克隆表達(dá)及其酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、嗜冷菌能在嚴(yán)酷的環(huán)境中生存使得人們對(duì)此類菌非常感興趣。為了適應(yīng)低溫環(huán)境，其本身能產(chǎn)生一些低溫酶。其中，β-D-半乳糖苷酶具有很大的商業(yè)利用前景。據(jù)調(diào)查，世界上有大約十分之一的人，在乳糖代謝方面存在著問題。通常，我們稱之為乳糖不耐受癥。這一部分人群因其自身缺乏β-D-半乳糖苷酶，在飲用牛奶時(shí)，因乳糖造成身體不適，出現(xiàn)腹瀉，嘔吐等不良反應(yīng)。因此，在牛奶的加工工藝上，目前主要采取直接添加乳酸菌(雙歧桿菌)或添加β-D-半乳糖苷酶的方法來將牛奶

2、中的乳糖降解。而低溫β-D-半乳糖苷酶具有在不破壞牛奶原有風(fēng)味的情況下降解乳糖的優(yōu)點(diǎn)。 本實(shí)驗(yàn)室分離到一株產(chǎn)β-D-乳糖苷酶的低溫菌命名為ON14，并且著重對(duì)其是否產(chǎn)低溫β-D-半乳糖苷酶進(jìn)行分析，結(jié)果表明ON14存在兩種β-D-乳糖苷酶基因分別命名為β-GalⅠ(3090bp)β-GalⅡ(2052bp)通過序列比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)β-GalⅠ屬糖苷水解酶第二家族。β-GalⅡ?qū)賚acG家族，它們的最適酶活溫度分別是5℃和37℃。因

3、β-GalⅠ良好的低溫酶活性。我們對(duì)其進(jìn)行外源表達(dá)并進(jìn)行純化，純化后β-GalⅠ添加到牛奶中。HPLC檢測(cè)結(jié)果表明，其乳糖降解效果明顯，具有很好的商業(yè)利用價(jià)值。 β-GalⅠ，β-GalⅡ作為胞質(zhì)內(nèi)β-D-半乳糖苷酶，我們猜測(cè)這組同工酶可能在ON14碳源代謝中起不同的作用。RT-PCR的結(jié)果表明當(dāng)乳糖作為唯一碳源時(shí)，在不同的溫度下，ON14將選擇不同的β-D-半乳糖苷酶降解乳糖。在Arthro-bacter屬中，這是首次報(bào)道不同