茶多酚對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721的生物效應(yīng).pdf

1、目的：　　通過(guò)茶多酚(TP)對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721作用，觀察TP對(duì)細(xì)胞增殖影響、細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變、細(xì)胞周期改變，確定TP對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的劑量反應(yīng)關(guān)系?！　P作用細(xì)胞后，測(cè)定細(xì)胞周期素D1(CyclinD1)蛋白表達(dá)量的改變，初步探討激活蛋白1(AP-1)、P16與CyclinD1在信號(hào)傳導(dǎo)通路中的作用，闡明TP對(duì)人肝癌細(xì)胞的分子作用機(jī)制。 方法：　　本實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721為研究

2、對(duì)象，觀察TP對(duì)人肝癌細(xì)胞的生物效應(yīng)，(1)MTT比色法測(cè)定細(xì)胞增殖率，確定TP對(duì)人肝癌細(xì)胞的劑量反應(yīng)關(guān)系。(2)蘇木精-伊紅(HE)染色法觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。(3)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期?！　檫M(jìn)一步探討TP作用人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721的機(jī)理，(1)免疫細(xì)胞化學(xué)、灰度值分析比較，確定細(xì)胞CyclinD1和P16蛋白表達(dá)量改變。(2)構(gòu)建AP-1報(bào)到質(zhì)粒，以psv-β-gal質(zhì)粒為內(nèi)參照測(cè)量AP-1蛋白活性。 結(jié)果：　

3、　TP可抑制體外培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞增殖，隨著TP濃度增加，作用時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞增殖率逐漸降低，其中48h內(nèi)，25.0mg/L與50.0mg/L兩劑量組增殖率差異有顯著性(增殖率分別為94.12％和80.08％，t=4.011，P＜0.01)。TP作用細(xì)胞后出現(xiàn)細(xì)胞凋亡改變，表現(xiàn)為細(xì)胞變小變圓，核染色質(zhì)致密濃縮。在48h內(nèi)隨著TP濃度的增加，S期細(xì)胞從60.4％(0mg/L)降低到23.9％(100mg/L)；G1期細(xì)胞從31.6％(0mg/L

4、)上升到63.6％(100mg/L)，細(xì)胞阻滯在G1期?！　P使CyclinD1蛋白表達(dá)降低，但P16蛋白表達(dá)沒(méi)有影響，TP抑制細(xì)胞AP-1活性。 結(jié)論：　　(1)TP抑制體外培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞增殖，細(xì)胞出現(xiàn)凋亡改變，細(xì)胞阻滯在G1期，并呈劑量反應(yīng)關(guān)系?！　?2)TP抑制人肝癌細(xì)胞增殖，阻滯在G1期的可能機(jī)理：茶多酚通過(guò)抑制細(xì)胞AP-1活性，降低CyclinD1表達(dá)，細(xì)胞阻滯在G1期，從而抑制人肝癌細(xì)胞增殖。但CyclinD