三氧化二砷聯(lián)合5-FU體外抑制人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究不同濃度三氧化二砷(As2O3)與5一Fu單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721體外生長(zhǎng)的影響。并初步探討其作用機(jī)制。 方法：分別及聯(lián)合應(yīng)用不同濃度的As2O3、5-FU作用于人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721。采用四氮唑藍(lán)(MTT)比色還原法測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率；倒置顯微鏡下及丫啶橙(AO/EB)染色，觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)的變化；應(yīng)用AO/EB染色法及AnnexinV-PI雙參數(shù)標(biāo)記染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；采用流式細(xì)胞術(shù)

2、檢測(cè)細(xì)胞周期的變化；應(yīng)用免疫組化法，檢測(cè)細(xì)胞中bc1-2，bax及Fas蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：(1)MTT顯示As2O3、5-FU可明顯抑制SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)，并隨著濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)(P<0.05或P<0.01)，As2O3與5-FU聯(lián)合用藥比單用As2O3或5-FU抑制效果更明顯(P<0.05或P<0.01)；(2)通過倒置顯微鏡及AO/EB染色，均觀察到As2O3和/或5-FU作用SMMC-7721細(xì)胞

3、后凋亡形態(tài)學(xué)的變化。 (3)AO/EB染色法及AnnexinV-PI雙標(biāo)記染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡率結(jié)果顯示，As2O3和5-FU均能誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡，AO/EB染色法同時(shí)表現(xiàn)出時(shí)間依賴性(P<0.05或P<0.01)，兩藥聯(lián)合使用時(shí)細(xì)胞凋亡更明顯(P<0.05或P<0.01)； (4)流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示As2O3、5-FU作用后SMMC-7721細(xì)胞中GO/G1期細(xì)胞比例下降，S期細(xì)胞比例上升，聯(lián)合用藥組GO/G1期細(xì)胞比例下降

4、、S期細(xì)胞比例上升更明顯(P<0.01)；(5)免疫細(xì)胞化學(xué)法結(jié)果顯示As2Oa、5-FU可使SMMC-7721細(xì)胞中bc1-2蛋白表達(dá)明顯下降，bax蛋白、Fas蛋白表達(dá)明顯升高，聯(lián)合用藥組較單藥組作用明顯增強(qiáng)(P<0.05或P<0.01)。 結(jié)論：(1)As2O3或5-FU單用可抑制人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721生長(zhǎng)，且呈時(shí)間、劑量依賴性，二者聯(lián)合應(yīng)用具有顯著協(xié)同作用。 (2)AS2O3聯(lián)合5-FU抗肝癌作用機(jī)制可能是：阻滯