DLK1基因在急性白血病中的表達及其意義的研究.pdf

1、急性白血病是造血干細胞惡性克隆性疾病，在近年來其發(fā)病率和死亡率呈增加趨勢，是一種較常見的惡性腫瘤，嚴重地威脅著人類的健康。白血病的發(fā)生、發(fā)展是多基因、多事件累積的結果，其過程涉及到許多瘤基因的激活和或抑瘤基因的失活，因此從分子水平闡明白血病的發(fā)病機制對白血病的防治具有十分重要的意義。 DLK1基因定位于人染色體14q32，全長1557 bP，編碼序列（coding sequence，CDS）含有1152核苷酸，編碼383個氨基

2、酸殘基。DLK1基因在肝癌、大鼠的嗜鉻細胞瘤、人類神經母細胞瘤、人類肺小細胞癌、腦膠質瘤中的表達上調，在腎細胞癌中表達下調，能夠高表達DLK1的腫瘤似乎都具有神經內分泌的特性。而DLK1在其他惡性腫瘤如白血病中的表達特性尚需進一步探討。 目的： 研究DLK1基因在急性白血病中的表達，及其與外周血白細胞數(shù)量、血小板數(shù)量的關系，以及在紅系分化中的作用。探討其在白血病中表達的意義。 方法： 1.采用逆轉錄多聚酶

3、鏈式反應（Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）、western blotting方法檢測人類不同類型急性白血病中DLK1的表達，分析DLK1表達與急性白血病病人臨床特征的相關性。 2.以人K562細胞株為研究對象，用氯化高鐵血紅素（hemin）誘導其向紅系分化，在分化的各時間點抽取RNA，用RT-PCR法測定各時間點DLK1的表達情況，觀察其與紅系分化的關

4、系。 結果： 1.65例急性白血病患者和34例對照組的骨髓單個核細胞總RNA經RT-PCR后均擴增出一條252bP的目的cDNA片段，提示白血病細胞、正常骨髓單個核細胞表達DLK1。與內參GAPDH相比，急性白血病患者表達量為0.574±0.173，其中急性淋巴細胞白血病患者表達量為0.579±0.172，急性髓系白血病患者表達量為0.571±0.175，對照組表達量為0.488±0.160，試驗組DLK1的相對表達量均

5、高于正常對照組，實驗組和對照組比較有顯著性差異（t=-2.406，P=0.018； t=-2.023，P=0.048； t=-2.146，P=0.035），急性淋巴細胞白血病患者和急性髓系白血病患者之間DLK1的相對表達量無顯著差異（P>0.05）。 2.65例急性白血病患者外周血白細胞計數(shù)和血小板計數(shù)，經pearson相關分析，結果顯示DLK1基因的表達水平與白血病患者外周血白細胞數(shù)無明顯相關性（r=-0.178，P=0.15

6、5）；與外周血血小板數(shù)亦無明顯相關性（r=-0.195，P=0.120）。 3.20例急性白血病患者骨髓單個核細胞所抽提的蛋白經western blotting檢測發(fā)現(xiàn)，急性白血病病人中，6/16 AML，2/4 ALL低表達DLK1蛋白，1/13對照組表達極低水平的DLK1蛋白，DLK1蛋白在急性白血病和對照組中的表達差異有統(tǒng)計學意義（x2=4.146，P=0.042），但同一樣本DLK1蛋白的表達和mRNA的表達不一致。K5

7、62細胞表達DLK1蛋白，HL-60細胞不表達DLK1蛋白。 4.K562細胞的總RNA經RT-PCR后擴增出一條252bP的目的cDNA片段，提示K562細胞表達DLK1。HL-60細胞未擴增出條帶，不表達DLK1。通過RT-PCR檢測了hemin誘導K562細胞向紅系分化過程中各時間點DLK1mRNA的變化，顯示隨著K562向紅系分化，DLK1mRNA的水平逐漸下降。 結論： 1.急性白血病細胞、正常骨髓單個