BMP-2腺病毒表達(dá)載體的構(gòu)建及對(duì)人成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的:骨形成蛋白具有誘導(dǎo)未分化間充質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞分化,促進(jìn)新骨形成的作用;隨著研究的深入,發(fā)現(xiàn)骨形成蛋白家族不僅具有誘導(dǎo)成骨功能,還具有調(diào)控胚胎發(fā)生發(fā)育、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)及調(diào)控某些腫瘤的發(fā)生與生長(zhǎng)的作用.由于其具有廣泛的生物學(xué)活性,特別是在骨損傷治療等方面所顯示的良好應(yīng)用前景,人們將關(guān)注點(diǎn)集中在利用骨形成蛋白進(jìn)行基因治療的研究中,初步研究結(jié)果已顯示出了誘人前景.本研究利用腺病毒感染種類(lèi)廣泛,不整合宿主細(xì)胞基因、無(wú)潛在的致突變性,且

2、較易獲得高滴度病毒、轉(zhuǎn)染效率高等特點(diǎn),以復(fù)制缺陷型腺病毒為載體構(gòu)建了含人骨形成蛋白2基因(hBMP-2)的重組腺病毒表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)染人胚肺成纖維細(xì)胞,觀察成纖維細(xì)胞被重組腺病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染后在成骨活性方面的影響,為后續(xù)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ).結(jié)論:采用體外連接技術(shù)成功構(gòu)建了含hBMP-2基因的重組腺病毒表達(dá)載體,且體外連接技術(shù)較傳統(tǒng)的同源重組方法簡(jiǎn)便,并避免了在同源重組過(guò)程中產(chǎn)生增殖性腺病毒的可能;同時(shí)體外實(shí)驗(yàn)見(jiàn)人胚肺成纖維細(xì)胞在轉(zhuǎn)染重組