農(nóng)桿菌介導(dǎo)的PStVcp基因反向序列遺傳轉(zhuǎn)化花生的研究.pdf

1、花生是我國主要油料作物，其品質(zhì)改良育種對國民的生產(chǎn)實(shí)踐具有重要的意義。在已報(bào)道的侵染花生的近20種病毒中，花生條紋病毒(PS tV)在我國分布最廣，花生條紋病田間發(fā)病率最高，是重要的花生病害，嚴(yán)重影響花生的產(chǎn)量和品質(zhì)。目前在花生及其近緣種尚未發(fā)現(xiàn)抗性種質(zhì)，單純通過常規(guī)育種無法解決該問題，而通過基因工程技術(shù)將外源抗病基因轉(zhuǎn)入花生栽培種則具有一定的可行性。本研究通過花生條紋病毒外殼蛋白的反向序列在花生中的遺傳轉(zhuǎn)化研究，初步建立了花生的轉(zhuǎn)化體

2、系，并進(jìn)行了初步的抗病性實(shí)驗(yàn)： 1 對影響花生遺傳轉(zhuǎn)化效率的外植體防褐化、Kan篩選壓、農(nóng)桿菌共培養(yǎng)時(shí)間等重要因素進(jìn)行了研究。 2 采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化花生，成功地將 PStVcp 反向重復(fù)序列導(dǎo)入花生。選擇花生子葉為轉(zhuǎn)化外植體，在芽誘導(dǎo)，分化和誘導(dǎo)生根等培養(yǎng)過程中，確立了 125mg/L 卡那霉素濃度為合適的篩選壓，50mg/L 為外植體生根的最低抑制濃度。培養(yǎng)基中Glu的濃度為1mg/L 時(shí)可以有效的防止外植體褐化。外植體

3、在OD<,600>為0.2-0.3的農(nóng)桿菌菌液中侵染1min后共培養(yǎng)4 d，再轉(zhuǎn)移至芽點(diǎn)誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行2-3周的叢生芽誘導(dǎo)，接著在芽點(diǎn)篩選培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選，待長出枝條在轉(zhuǎn)移至枝條分化培養(yǎng)基進(jìn)行進(jìn)一步的篩選，得到了26個(gè)再生株系。 3 通過對轉(zhuǎn)化株的PCR和southern雜交檢測，表明目的片段已整合到植物基因組中。得到26株轉(zhuǎn)化株，初步檢測結(jié)果表明有3株為陽性轉(zhuǎn)化株。 4 通過ELISA檢測表明PStVcp cp基因能有