抗人FcεRIα FaB-聚合物膠束-雷公藤紅素誘導(dǎo)肥大細(xì)胞凋亡過(guò)敏性疾病.pdf

1、研究目的:構(gòu)建偶聯(lián)抗人FcεRIα Fab包裹雷公藤紅素的聚合物膠束（抗人FcεRIα Fab-聚合物膠束-雷公藤紅素三聚物），分析其對(duì)肥大細(xì)胞的靶向性、增殖抑制及促凋亡作用，探討其在過(guò)敏性哮喘小鼠體內(nèi)的分布及對(duì)哮喘和被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)的抑制效果。
　　研究方法:①采用薄膜水化法制備雷公藤紅素-聚合物膠束，EDC偶聯(lián)法構(gòu)建抗人FcεRIα Fab-聚合物膠束-雷公藤紅素三聚物，采用粒度分析儀、透射電子顯微鏡分別觀察膠束的粒徑和形態(tài)，

2、反相-高效液相色譜法測(cè)定其包封率和載藥量。②體外以人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞KU812(表面高表達(dá)FcεRI，靶細(xì)胞)和人未成熟肥大細(xì)胞HMC-1（表面幾乎不表達(dá)FcεRI，非靶細(xì)胞）為研究對(duì)象，以香豆素6為探針，采用流式細(xì)胞儀和激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)三聚物的靶向作用;CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖抑制率，Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)記合并流式細(xì)胞儀定量分析凋亡細(xì)胞比率，酶法和免疫印跡分別檢測(cè)凋亡分子caspase3活性和切割的PARP

3、表達(dá)水平，分析三聚物對(duì)肥大細(xì)胞增殖抑制及凋亡作用。③以卵清蛋白免疫BABL/c小鼠建立哮喘模型，以近紅外熒光素DiR為探針，觀察三聚物在過(guò)敏性哮喘小鼠體內(nèi)的分布及其對(duì)肺組織的靶向性;給予三聚物干預(yù)治療，ELISA法檢測(cè)血清OVA特異性IgE（OVA-sIgE）和肺泡灌洗液(BALF)組胺的水平，采用Luminex技術(shù)測(cè)定BALF中Th1/Th2細(xì)胞因子的含量，計(jì)數(shù)BALF白細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，觀察肺組織炎癥情況，分析三聚物對(duì)過(guò)敏性

4、哮喘的治療效果。此外，通過(guò)皮內(nèi)注射IgE-DNP和尾靜脈注射DNP-HSA誘導(dǎo)小鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)，給予三聚物干預(yù)治療，觀察伊文氏藍(lán)擴(kuò)散程度，驗(yàn)證三聚物對(duì)過(guò)敏反應(yīng)的抑制作用。
　　研究結(jié)果:①制備了抗人FcεRIα Fab-聚合物膠束-雷公藤紅素三聚物，包封率為98.9±3.3％，載藥量為22.8±1.0％，粒徑在93.43nm左右，分布均勻，呈短棒狀或橢圓狀。②流式細(xì)胞儀和激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)結(jié)果顯示抗人FcεRIα Fab-聚

5、合物膠束進(jìn)入靶細(xì)胞的量顯著高于未偶聯(lián)抗體的膠束;細(xì)胞增殖和凋亡的結(jié)果表明抗人FcεRIα Fab-聚合物膠束-雷公藤紅素三聚物作用組的肥大細(xì)胞抑制率、凋亡細(xì)胞比例、caspase3活性和切割的PARP水平均顯著高于單純的雷公藤紅素和雷公藤紅素-聚合物膠束組。③體內(nèi)研究結(jié)果表明，三聚物能促進(jìn)藥物在過(guò)敏性哮喘小鼠的肺組織聚集，并有效地減少哮喘小鼠血清OVA-sIgE、BALF組胺和Th2細(xì)胞因子(IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α)

6、的合成，增加抗炎因子IL-10的分泌，降低BALF白細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量，減輕肺組織炎細(xì)胞浸潤(rùn)和黏液分泌;此外三聚物能有效減少伊文氏藍(lán)的滲出，降低血管通透性，減輕小鼠被動(dòng)皮膚過(guò)敏反應(yīng)。且三聚物的抗過(guò)敏效果明顯比單純的雷公藤紅素和雷公藤紅素-聚合物膠束組更強(qiáng)。
　　研究結(jié)論:成功構(gòu)建了抗人FcεRIα Fab-聚合物膠束-雷公藤紅素三聚物，該三聚物具有良好的表征和肥大細(xì)胞靶向性，能特異地抑制肥大細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡;在體內(nèi)能促進(jìn)藥