膝前交叉韌帶重塑部位及其分子機(jī)制初探.pdf

1、目的：
　　本文研究前交叉韌帶不同分束在前交叉韌帶損傷修復(fù)中的作用，探討是否前交叉韌帶的前內(nèi)側(cè)在前交叉韌帶中較后外側(cè)束作用更大。
　　方法：
　　隨機(jī)抽取本院2010年6月至2012年10月具有術(shù)前MRI資料并進(jìn)行膝關(guān)節(jié)鏡探查的病例進(jìn)行回顧性分析，通過膝關(guān)節(jié)MRI矢狀位及斜矢狀位雙維掃描，檢測(cè)前交叉韌帶前內(nèi)側(cè)束、后外側(cè)束的長(zhǎng)度、厚度、寬度及脛骨止點(diǎn)之前和脛骨止點(diǎn)之后的長(zhǎng)度。在無菌環(huán)境下，從10具自愿捐贈(zèng)的新鮮尸體上取膝

2、關(guān)節(jié)，并取出膝關(guān)節(jié)交叉前韌帶，根據(jù)ACL的解剖形態(tài)學(xué)特點(diǎn)和膝關(guān)節(jié)不同伸屈角度下的緊張狀態(tài)，將ACL分成前內(nèi)側(cè)束和后外側(cè)束兩個(gè)功能纖維束，束間被疏松結(jié)締組織和血管分離。通過生物動(dòng)力學(xué)測(cè)試了前交叉韌帶不同部位的結(jié)構(gòu)和力學(xué)特點(diǎn)，在肌腱恢復(fù)后行拉斷試驗(yàn)，記錄負(fù)荷-延長(zhǎng)曲線，并根據(jù)此前測(cè)得的初長(zhǎng)度及橫截面積按以下公式計(jì)算最大應(yīng)變和最大應(yīng)力；提取總RNA，并反轉(zhuǎn)錄成
　　cDNA后，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)前內(nèi)側(cè)束和后外側(cè)束中與肌腱修復(fù)相關(guān)的常

3、見MMPs基因；再通過將ACL的前內(nèi)側(cè)束和后外側(cè)束兩個(gè)功能纖維束，經(jīng)固定、石蠟包埋，利用MMP-2和MMP-3的多克隆抗體為一抗，進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)；將前內(nèi)側(cè)束和后外側(cè)束兩個(gè)功能纖維束中的組織分別收集，勻漿后提取總蛋白，用Western blotting分析不同分束中MMP-2、MMP-3的表達(dá)量，將WB條帶進(jìn)行灰度掃描，灰度和條帶面積的乘積即為各蛋白相對(duì)表達(dá)水平。檢測(cè)了MMPs在前交叉韌帶不同部位中的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：

4、　　1.通過影像學(xué)和生物動(dòng)力學(xué)測(cè)試了前交叉韌帶不同部位的結(jié)構(gòu)和力學(xué)特點(diǎn)；前內(nèi)束的最大應(yīng)力和最大應(yīng)變比后外束的大，進(jìn)一步說明前交叉韌帶的脛骨止點(diǎn)的前部具有成為臨床肌腱重建最佳部位的潛力，為今后的臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　2.用RT-PCR、免疫組化、western-blot檢測(cè)了MMPs在前交叉韌帶不同部位中的表達(dá)水平，結(jié)果表明MMP-2在前內(nèi)束表達(dá)較高，在后外側(cè)束的表達(dá)較低；MMP-3在前內(nèi)側(cè)束表達(dá)較低，在后外側(cè)束的表達(dá)較高，進(jìn)