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文檔簡介
1、目的：揭示IGF-1保護(hù)心肌細(xì)胞免于凋亡的更為精細(xì)的作用機(jī)制，為闡明IGF-1抗心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制提供線索。
方法：⑴體外培養(yǎng)乳鼠原代心肌細(xì)胞，加入IGF-1(10nM)的同時(shí)分別加入PI3、ERK1/2、Raf-1(20μM)三條通路抑制劑，通過Realtime-PCR和Western Blot方法檢測(cè)BTEB及CYP3A基因表達(dá)情況以觀察IGF-1通過哪條通路對(duì)BTEB及CYP3A基因產(chǎn)生影響。⑵轉(zhuǎn)入BTEB特異性si
2、RNA，通過Realtime-PCR和Western Blot方法檢測(cè)CYP3A基因表達(dá)情況以觀察BTEB對(duì)CYP3A基因的影響。⑶用無血清加過氧化氫(200μM)誘導(dǎo)乳鼠原代心肌細(xì)胞凋亡，然后轉(zhuǎn)染CYP3A特異性siRNA，通過Hoechst33258、TUNEL、Caspase-3及AnnexinV-FITC/PI雙染色等檢測(cè)方法檢測(cè)乳鼠心肌細(xì)胞凋亡情況。
結(jié)果：①IGF-1通過ERK1/2通路抑制BTEB及CYP3A
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